人骨髓間充質(zhì)干細胞體外成骨分化及與Bio-gide膠原膜復(fù)合培養(yǎng)的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗擬研究人骨髓間充質(zhì)干細胞(human mesenchymal stem cells，hMSCs)分離、培養(yǎng)與鑒定的方法，觀察其成骨細胞表型特征，探討其作為牙周組織工程種子細胞的可行性；將Bio-gide膠原膜與hMSCs進行體外復(fù)合培養(yǎng)，行形態(tài)學(xué)觀察。 方法：體外分離培養(yǎng)hMSCs，進行形態(tài)學(xué)觀察，增殖測定，細胞表面抗原檢測；取生長狀態(tài)的良好的第三代hMSCs，分別于不同培養(yǎng)條件下(實驗組：成骨誘導(dǎo)液；對照組：普通培

2、養(yǎng)液)進行培養(yǎng)，檢測細胞堿性磷酸酶表達及礦化能力。將hMSCs與Bio-gide膠原膜進行體外復(fù)合培養(yǎng)，通過倒置相差顯微鏡，掃描電鏡進行觀察。 結(jié)果：梯度密度離心法結(jié)合貼壁篩選法能獲得高純度高活性的hMSCs。經(jīng)成骨誘導(dǎo)后可表達高水平堿性磷酸酶活性(p＜0.05)，連續(xù)培養(yǎng)28天左右可形成礦化結(jié)節(jié)。hMSCs可在Bio-gide膠原膜上貼附增殖，并復(fù)層生長。 結(jié)論：hMSCs 取材方便、創(chuàng)傷小；具有成骨分化潛能，經(jīng)誘導(dǎo)后