人骨髓間充質干細胞復合PLGA的體外灌流培養(yǎng)及成骨細胞分化研究.pdf

1、骨組織工程為骨缺損修復提供了一種新的療法。人骨髓間充質干細胞(hMSCs)是一種理想的骨組織工程種子細胞,被廣泛用于與支架材料復合構建組織工程骨。聚乳酸-乙醇酸(PLGA)支架在軟骨和骨組織工程應用中顯示出較好的性能而被廣泛接受。灌流式生物反應器常用于培養(yǎng)骨骼組織。 本文目的是評價灌流培養(yǎng)條件下人骨髓間充質干細胞在PLGA支架中的生長增殖及分化動態(tài)。實驗所用支架孔隙率為94.5％-98.0％,孔徑大小為280-450pm。首先

2、通過對三個不同接種密度(1×106,2×105,4×106個/ml)接種效率的比較,確定了較為合適的接種密度(2×106個/ml)。通過對三個不同流速(0.2,0.4,0.8ml/min)培養(yǎng)效果的比較,確定了較為合適的灌流流速(0.2ml/min)。通過合適的接種密度和合適的灌流流速立體培養(yǎng)hMSCs,研究細胞在支架中的生長動態(tài)。MTT法檢測細胞活力顯示,在整個灌流培養(yǎng)期間,細胞活力持續(xù)顯著增加,表明細胞增殖旺盛。DNA定量分析表明從

3、接種到培養(yǎng)第6天細胞數量顯著增加,之后增殖變緩。用掃描電鏡(SEM)來觀察細胞在支架中的分布以及細胞外基質的分泌情況,結果顯示第5天細胞已經長入支架孔內部,并見有薄層基質合成；第11天,細胞外基質已形成厚厚的一層將支架基本完全覆蓋?；罴毎麩晒馊旧吞K木素-伊紅(H&E)染色可見細胞在支架中均勻分布。通過成骨細胞定向誘導分化實驗,檢測支架中hMSCs的成骨細胞分化效率。堿性磷酸酶染色和酶活性檢測結果表明,成骨誘導第7天細胞已經開始進入早期