阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細胞株cyclinD-,1-表達及對細胞周期的影響.pdf

1、首都醫(yī)科大學碩士學位論文阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細胞株cyclinD表達及對細胞周期的影響姓名：胡海一申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學（消化系?。┲笇Ы處煟簭堜?0070301首都醫(yī)科大學碩士學位論文阿司匹林與煙草提取物對食管鱗癌細胞株c y c | ．n D ，表達及對細胞周期的影響摘要目的探討細胞周期蛋白D I ( c y c l i n D l ) 在食管鱗癌細胞株E C l 0 9 的表達情況，檢測C O X - 2 抑制

2、劑阿司匹林及煙草提取物作用前后c y c l i n D l 蛋白水平及細胞周期的變化。方法應用不同濃度的阿司匹林及煙草提取物C E ( c h l o r o f o r m e x t r a c t ，C E ) 作用于E C l 0 9 細胞4 8 小時后，采用M T T 法檢測細胞活性變化及活細胞數(shù)目；應用R T - P C R 方法檢測E C I I Y ) 細胞c y c l i n D l 基因表達水平；應用W e s

3、t e r n b l o t 方法檢測作用前后e y c l i n D l 蛋白表達水平的變化；應用P I 單染流式細胞儀( f l o we y t o m e t r y , F C M ) 技術檢測不同濃度阿司匹林及C E 作用前后細胞周期的變化。噻唑藍法[ M T T , 3 - ( 4 ，5 ·d i m e t h y l t h i a z o l ?2y 02 ，5 一d i p h c n y l t e

4、 t r a z o l i u mb r o m i d e ] ：將細胞種植于9 6 孔板培養(yǎng)2 4 小時，然后加入不同濃度的阿司匹林及煙草提取物C E ，孵育4 8 小時，最后加入噻唑藍并進行吸光度檢測。逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應法( R T - P C R ) ．“ 從細胞提取總R N A ，并用2 腭總R N A逆轉(zhuǎn)錄成e D N A 。然后將2m e D N A 加入P C R 擴增體系進行擴增，最后將P C R產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠中電