Kim-1特異性siRNA對(duì)腎癌細(xì)胞株786-0細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的
　　觀察腎損傷分子-1(Kim-1)特異性小干擾RNA（siRNA）沉默Kim-1基因后，對(duì)腎細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O細(xì)胞的細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期的影響。探討Kim-1作為腎細(xì)胞癌靶向治療的新靶點(diǎn)的可能。
　　方法
　　采用脂質(zhì)體介導(dǎo)方法將3條對(duì)人Kim-1基因序列特異的siRNA序列(50nmol/L)轉(zhuǎn)染進(jìn)入腎細(xì)胞癌786-O細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后24h在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后48h采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(qR

2、T-PCR)檢測(cè)Kim-1基因的沉默效果，選取沉默效果較好的一組進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)(轉(zhuǎn)然后24h，48h，72h，96h)細(xì)胞增殖的情況，轉(zhuǎn)染后48h采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的分布情況。
　　結(jié)果
　　1.脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染能有效地將siRNA序列轉(zhuǎn)染進(jìn)入786-O細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染有效率為(94.36±2.57)％。
　　2.Kim-1-siRNA能有效下調(diào)786-O細(xì)胞中Kim-1基因

3、的表達(dá)水平，三個(gè)不同序列的Kim-1-siRNA的沉默效果分別為(72.47±5.91)％、(12.98±2.21)％、(29.56±3.88)％;而陰性對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量為(96.56±3.47)％(P＜0.05)。
　　3.在腎細(xì)胞癌中沉默Kim-1基因的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖受到抑制，3組轉(zhuǎn)染后96h的增殖抑制率分別為空白對(duì)照組0％、陰性對(duì)照組(3.80±1.24)％、實(shí)驗(yàn)組(54.31±3.82)％(P＜0.05)。
　

4、　4.在腎細(xì)胞癌中沉默Kim-1基因的表達(dá)后使細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期，轉(zhuǎn)染48h后檢測(cè)各組細(xì)胞G0/G1期所占的比例分別為空白對(duì)照組(38.44±1.82)％、陰性對(duì)照組(42.06±2.15)％、實(shí)驗(yàn)組(63.69±2.87)％（P＜0.05）。
　　結(jié)論
　　1.Kim-1特異性siRNA可有效沉默腎細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O中Kim-1的表達(dá)。
　　2.在腎細(xì)胞癌細(xì)胞株786-O中沉默Kim-1分子的表達(dá)，可使細(xì)