MT-3和MT-1E基因轉(zhuǎn)梁食管鱗癌細(xì)胞株對(duì)其細(xì)胞周期的影響.pdf

1、目的:食管癌是目前對(duì)人類健康和生命構(gòu)成嚴(yán)重威脅的惡性腫瘤之一,其病死率在世界范圍居惡性腫瘤的第七位。我國(guó)是食管癌的高發(fā)國(guó)家,在我國(guó)惡性腫瘤中其發(fā)病率居第四位,特別是河北南部、河南北部及山西的部分地區(qū)為高發(fā)地區(qū)。因此,深入研究食管癌的發(fā)病機(jī)制,以有效地對(duì)其進(jìn)行預(yù)防和治療有著非常重要的意義。研究表明,食管癌的發(fā)生發(fā)展并非單個(gè)分子事件,而是一個(gè)多因素、多階段、長(zhǎng)時(shí)間的多步驟過(guò)程,涉及多個(gè)癌基因和抑癌基因的改變以及細(xì)胞調(diào)控機(jī)制的異常。
　

2、　 有關(guān)MT-1和MT-2基因的研究已有很多,有文獻(xiàn)報(bào)道MT-1和MT-2基因在食管癌組織中呈高表達(dá)狀態(tài)。而MT-3基因研究的較少,已知MT-3基因是細(xì)胞內(nèi)一種金屬硫蛋白的編碼基因,不僅具有許多重要的生理功能,還可以抑制細(xì)胞增殖。我們的前期研究顯示在食管癌組織中廣泛存MT-3基因的超甲基化,而且這種超甲基化可導(dǎo)致MT-3表達(dá)水平的下調(diào)。基于以上研究,本實(shí)驗(yàn)采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù),研究MT-3和MT-1E基因轉(zhuǎn)染人食管鱗癌Eca-109和TE

3、13細(xì)胞株后對(duì)其細(xì)胞周期的影響。
　　 方法:1選取食管鱗癌Eca-109和TE13細(xì)胞株,用RPMI1640培養(yǎng)基在六孔板中進(jìn)行培養(yǎng),在細(xì)胞匯合達(dá)70％后,準(zhǔn)備進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
　　 2分別取含有EX-T3737-M03-MT-3、EX-T3737-M03、EX-T2598-M56-MT-1E及EX-T2598-M56四種質(zhì)粒DNA的大腸桿菌菌株,經(jīng)過(guò)夜培養(yǎng)后提取質(zhì)粒DNA,并測(cè)定其濃度與純度;然后配制質(zhì)粒DNA/脂質(zhì)體

4、復(fù)合物,并設(shè)空白對(duì)照,進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
　　 3將以上質(zhì)粒DNA/脂質(zhì)體復(fù)合物與兩種細(xì)胞株共同培養(yǎng),分別在24h、48h、72h用熒光顯微鏡觀察質(zhì)粒DNA中熒光蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況,并計(jì)算細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率,以確定質(zhì)粒DNA在細(xì)胞內(nèi)最佳轉(zhuǎn)染時(shí)間。
　　 4在質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染Eca-109和TE13細(xì)胞株48h后,分別收集六孔板中各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞及空白對(duì)照組細(xì)胞,應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期的變化情況。
　　 5所有計(jì)量資料用均

5、值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,兩樣本均數(shù)比較選擇t檢驗(yàn)或t’檢驗(yàn),以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,統(tǒng)計(jì)過(guò)程由SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件完成。
　　 結(jié)果:1四種質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染食管鱗癌Eca-109及TE13細(xì)胞株后,在24h、48h、72h熒光顯微鏡觀察到各轉(zhuǎn)染組均見有熒光標(biāo)記。EX-T3737-M03-MT-3和其空載體EX-T3737-M03轉(zhuǎn)染組呈綠色熒光;EX-T2598-M56-MT-1E和其空載體EX-T2598-M56轉(zhuǎn)染組呈紅

6、色熒光。轉(zhuǎn)染48h后細(xì)胞熒光表達(dá)強(qiáng)度最強(qiáng),約占細(xì)胞總數(shù)的80％,提示轉(zhuǎn)染成功,且效率較高。
　　 2 EX-T3737-M03-MT-3和EX-T3737-M03在轉(zhuǎn)染Eca-109和TE13細(xì)胞株48h后,其G0/G1期的細(xì)胞比例分別為70.97±1.58％、53.20±2.13％(P＜0.05),S期的細(xì)胞比例分別為14.32±1.23％、31.50±1.59％(P＜0.05),G2/M期的細(xì)胞比例分別為14.72±1.08

7、％、15.30±1.38％(P＞0.05)。
　　 3 EX-T2598-M56-MT-1E和EX-T2598-M56在轉(zhuǎn)染Eca-109和TE13細(xì)胞株48h后,其G0/G1期的細(xì)胞比例分別為54.58±2.38％、53.02±2.16％(P＞0.05),S期的細(xì)胞比例分別為30.15±1.77％、31.90±1.71％(P＞0.05),G2/M期的細(xì)胞比例分別為15.27±1.06％、15.08±0.78％(P＞0.05)。

8、
　　 4 EX-T3737-M03-MT-3和EX-T2598-M56-MT-1E在轉(zhuǎn)染Eca-109和TE13細(xì)胞株48h后,其G0/G1期的細(xì)胞比例分別為70.97±1.58％、54.58±2.38％(P＜0.05),S期的細(xì)胞比例分別為14.32±1.23％、30.15±1.77％(P＜0.05),G2/M期的細(xì)胞比例分別為14.72±1.08％、15.27±1.06％(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:1 MT-3