emu-mir-71作為潛在藥靶-Nemo樣激酶抑制性作用分子的初步探究.pdf

1、泡球蚴病是由多房棘球絳蟲中絳期幼蟲（多房棘球蚴）感染而引起的一種嚴(yán)重危害人畜健康的人獸共患寄生蟲病。雖然多房棘球絳蟲全基因組和部分miRNAs都已注釋，但對(duì)多房棘球蚴的生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制了解還很少。因此，開展與多房棘球蚴生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)的調(diào)控分子（如miRNAs）的研究，不僅有助于深入揭示多房棘球蚴的生長(zhǎng)發(fā)育機(jī)制，而且對(duì)以miRNAs作為其靶基因的抑制性分子研究，探索新的藥物靶點(diǎn)和新型生物制劑具有重要的意義。
　　鑒于此，本論文開展了以下幾

2、方面的研究:
　　1.根據(jù)課題組前期對(duì)多房棘球蚴miRNAs的分析結(jié)果，選定在激活的原頭蚴中呈現(xiàn)上調(diào)表達(dá)的miRNA分子——emu-miR-71，進(jìn)行生物信息學(xué)分析。結(jié)果表明，emu-miR-71的種子序列與miR-71家族的完全一致，其基因前體及基因簇進(jìn)化保守，提示其功能保守。并且多房棘球絳蟲的哺乳動(dòng)物宿主中均不存在miR-71，這為研制基于emu-miR-71的生物藥物提供了可能。
　　2.利用鎖核酸技術(shù)，通過原位雜交分

3、析了emu-miR-71在多房棘球蚴中的組織分布特征。結(jié)果顯示，幾乎所有的原頭蚴中都表達(dá)emu-miR-71，但表達(dá)量卻因原頭蚴發(fā)育時(shí)期的不同而存在差異，即在無鉤原頭蚴中表達(dá)量高，在有鉤原頭蚴中表達(dá)量低。利用免疫組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)多房棘球蚴成體未分化細(xì)胞(neoblasts)分布特征進(jìn)行的初步分析表明，多房棘球蚴neoblasts無明顯的組織分布特征，且數(shù)量較少。而表達(dá)emu-miR-71的陽性細(xì)胞在多房棘球蚴中分布很廣，數(shù)量明顯多于ne

4、oblasts。說明emu-miR-71在多房棘球蚴neoblasts中呈非特異性表達(dá)，不能作為鑒定neoblasts的分子標(biāo)志。
　　3.通過靶基因序列比對(duì)及預(yù)測(cè)分析，選擇與秀麗隱桿線蟲相似性達(dá)75％且具有重要功能的基因——Nemo樣激酶基因(nlk)作為emu-miR-71的靶基因，利用雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)檢測(cè)的結(jié)果表明，emu-miR-71可與nlk基因mRNA的3'UTR特異性結(jié)合，從而抑制NLK的表達(dá)，初步證明nlk為