雷帕霉素抑制肝癌腫瘤血管生成的實驗研究.pdf

1、器官移植術(shù)后傳統(tǒng)免疫抑制劑的應用可增加腫瘤復發(fā)或新生腫瘤發(fā)生的機會，即使器官移植術(shù)很成功，這也可能是造成患者死亡的重要原因。新型免疫抑制劑雷帕霉素不僅具有肝、腎毒性低，患者耐受性良好等特點，據(jù)最近報道還具有抑制多種腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的作用，包括結(jié)腸癌、腎癌、胰腺癌、乳腺癌等。研究證實雷帕霉素抗腫瘤機制可能與抑制腫瘤細胞增殖、誘發(fā)腫瘤細胞凋亡；抑制腫瘤血管生成等有關(guān)，但具體機制尚不清楚?！澳[瘤的生長與轉(zhuǎn)移具有血管依賴性”這一理論已經(jīng)被廣泛接受

2、，肝癌為富血管腫瘤，抑制腫瘤血管生成可作為控制肝癌增殖、轉(zhuǎn)移復發(fā)的重要手段。近年來國內(nèi)、外研究證實，雷帕霉素可以通過抑制肝癌細胞增殖，誘發(fā)肝癌細胞凋亡抑制腫瘤生長，至于雷帕霉素能否通過抑制肝癌腫瘤血管生成抑制肝癌生長與轉(zhuǎn)移國內(nèi)、外鮮有報道。 目的:探討雷帕霉素對肝癌腫瘤血管生成的抑制作用及相關(guān)機制，同時檢測對肝癌生長的抑制作用。 方法:體內(nèi)實驗，建立人肝癌裸鼠皮下移植瘤模型，隨機分為雷帕霉素常規(guī)劑量組(1.5 mg/kg

3、/d)、低劑量組(0.15 mg/kg/d)、高劑量組(4.5 mg/kg/d)及對照組，腹腔注射給藥，對照組給予相同體積生理鹽水。用藥3周后摘眼球放血法處死動物，留取血清標本，酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達水平：實驗中，每3天記錄皮下種植瘤大小并觀察動物一般狀況，繪制腫瘤生長曲線：實驗結(jié)束后，小心剝離皮下腫瘤，游標卡尺測量腫瘤大小，稱量瘤重及鼠重，標本石蠟包埋常規(guī)病理切片，CD34標記內(nèi)皮細胞行腫瘤

4、微血管(MVD)記數(shù)；打開腹腔及胸腔，仔細觀察有無轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)，留取動物肝臟及雙肺，通過大體觀察及病理切片檢測腫瘤轉(zhuǎn)移情況。體外實驗，原代培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞，通過MTT實驗，遷移實驗，流式細胞術(shù)檢測雷帕霉素對VEGF誘導的血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移、細胞周期及凋亡的影響。 結(jié)果：體內(nèi)實驗中，雷帕霉素常規(guī)劑量組裸鼠皮下腫瘤生長受到抑制，腫瘤MVD明顯降低，血清VEGF表達水平顯著降下降(142.35±53.64 Vs 259.21±8

5、2.68.17.09±2.34 vs 25.77±2.49，66.84±6.90 vs 78.78±3.63)(P<0.05)。與對照組比較，低劑量組，高劑量組腫瘤體積、MVD及血清VEGF水平雖受到一定程度抑制，但是無統(tǒng)計學意義。同時，以上各組動物中均未觀察到肝癌轉(zhuǎn)移病灶。體外實驗中，雷帕霉素抑制了VEGF誘導的HVECs增殖與遷移，流式細胞術(shù)證實HUVECs被扣留在G0/G1期，細胞凋亡率增加。 結(jié)論:(1)雷帕霉素可通過