血小板活化因子在脊髓水平的疼痛調(diào)控作用.pdf

1、研究背景：
　　 組織損傷和炎癥常引起慢性疼痛，表現(xiàn)為自發(fā)性疼痛、痛覺過敏和觸覺異常性痛敏。近十年來，對(duì)慢性疼痛的研究取得了較大的進(jìn)展，痛覺傳導(dǎo)通路的中樞敏化被認(rèn)為是慢性疼痛產(chǎn)生和維持的重要原因。然而，中樞敏化的機(jī)制尚未完全闡明。研究表明，在中樞敏化機(jī)制中，大量的內(nèi)源性神經(jīng)介質(zhì)參與了痛覺信號(hào)的傳導(dǎo)和調(diào)控。
　　 血小板活化因子(platelet-activating factor，PAF)是免疫細(xì)胞和炎癥細(xì)胞產(chǎn)生的一種內(nèi)

2、源性磷脂，是一種強(qiáng)效的炎癥介質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，PAF與中樞神經(jīng)系統(tǒng)許多生理功能和病理生理過程有關(guān)。神經(jīng)細(xì)胞生成PAF，同時(shí)，神經(jīng)細(xì)胞也是PAF的靶細(xì)胞，PAF在神經(jīng)信號(hào)傳遞中發(fā)揮重要作用。近幾年有研究報(bào)道表明PAF可能參與神經(jīng)中樞痛覺信號(hào)的傳導(dǎo)和調(diào)控，而PAF在痛覺信號(hào)傳導(dǎo)和調(diào)控中的作用及相應(yīng)機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。
　　 前列腺素類物質(zhì)(prostaglandins，PGs)在炎性疼痛中的作用已得到廣泛認(rèn)可，隨著研究的深入，PGs在

3、其它類型疼痛如神經(jīng)病理性疼痛中的作用也受到關(guān)注。目前的研究認(rèn)為，在慢性疼痛的產(chǎn)生及維持中，中樞及外周PGs均起作用。脊髓是調(diào)控痛覺信號(hào)的重要中樞，脊髓水平的PGs在疼痛的產(chǎn)生及維持中占有重要地位。體外實(shí)驗(yàn)表明，PAF可誘導(dǎo)培養(yǎng)的大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞釋放前列腺素E2(prostaglandin E2，PGE2)，這一研究提示PGE2及其限速酶環(huán)氧酶(cyclooxygenase，COX)可能參與神經(jīng)中樞PAF調(diào)控痛覺信號(hào)的機(jī)制，但目前尚無相關(guān)

4、研究的報(bào)道。
　　 傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為，神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞僅對(duì)神經(jīng)元起著支持和營養(yǎng)作用，而沒有細(xì)胞之間的信號(hào)傳遞功能，因而認(rèn)為從外周傳入的痛覺信號(hào)在脊髓水平的調(diào)控和放大以及痛敏狀態(tài)的產(chǎn)生僅與神經(jīng)元及其遞質(zhì)有關(guān)，而與神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞無關(guān)。近些年，越來越多的研究證據(jù)表明膠質(zhì)細(xì)胞與疼痛調(diào)控有著密切關(guān)系，特別是在如炎癥和神經(jīng)損傷等病理狀態(tài)下。膠質(zhì)細(xì)胞的激活及其促炎細(xì)胞因子的釋放在病理狀態(tài)下的痛覺過敏的產(chǎn)生和疼痛持續(xù)狀態(tài)中發(fā)揮重要作用。脊髓和膠質(zhì)細(xì)胞大

5、量表達(dá)PAF受體，PAF可激活體外培養(yǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞，并誘導(dǎo)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)遞質(zhì)和促炎性細(xì)胞因子。以上研究結(jié)果提示，膠質(zhì)細(xì)胞的激活及其促炎性細(xì)胞因子的釋放可能參與神經(jīng)中樞PAF調(diào)控痛覺信號(hào)的機(jī)制，而目前尚無相關(guān)報(bào)道。
　　 目前的研究認(rèn)為，PAF通過與其受體相結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，PAF有二類受體結(jié)合位點(diǎn)，即低結(jié)合力的細(xì)胞膜表面結(jié)合位點(diǎn)和高結(jié)合力的細(xì)胞內(nèi)位點(diǎn)。抑制PAF受體可減輕大鼠炎性痛反應(yīng)，而PAF受體拮抗劑用于其它疼痛模型如神

6、經(jīng)病理性疼痛的研究尚未見報(bào)道。
　　 為了進(jìn)一步探討PAF在痛覺信號(hào)調(diào)控中的作用及其機(jī)制，本課題進(jìn)行了以下實(shí)驗(yàn)研究：(1)鞘內(nèi)注射PAF對(duì)大鼠痛閾和脊髓環(huán)氧酶表達(dá)的影響，不同選擇性環(huán)氧酶抑制劑對(duì)鞘內(nèi)注射PAF所致大鼠痛敏的抗傷害效應(yīng)；(2)鞘內(nèi)注射PAF對(duì)脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活性和促炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響；(3)鞘內(nèi)注射PAF受體拮抗劑對(duì)SNI神經(jīng)痛大鼠鎮(zhèn)痛作用的研究。
　　 研究方法：
　　 1. 鞘內(nèi)注射PAF對(duì)大鼠

7、痛閾和脊髓環(huán)氧酶表達(dá)的影響
　　 雄性Sprague-Dawley大鼠48只隨機(jī)分為6組，每組8只，鞘內(nèi)置管：人工腦脊液(artificial cerebral spinal fluid，ACSF)組，鞘內(nèi)注射ACSF 10 μl；PAF組，鞘內(nèi)注射PAF 5 μg；生理鹽水(normal saline，NS)組，尾靜脈注射1.5 ml生理鹽水，10 min后鞘內(nèi)注射PAF 5 μg；SC-560(環(huán)氧酶1選擇性抑制劑，150

8、μg/kg)組，NS-398(環(huán)氧酶2選擇性抑制劑，150 μg/kg)組和吲哚美辛(低選擇性環(huán)氧酶抑制劑，300 μg/kg)組，SC-560、NS-398和吲哚美辛分別溶解于1.5 ml生理鹽水，尾靜脈注射給藥，10 min后鞘內(nèi)注射PAF 5 μg。PAF均溶解于10 μl ACSF。給藥前測機(jī)械縮爪閾(PWMT)和熱縮爪潛伏期(PWTL)基礎(chǔ)值，ACSF組和PAF組鞘內(nèi)給藥15 min后測PWMT和PWTL值，連續(xù)5 h每15

9、min測定一次；生理鹽水組、SC-560組、NS-398組和吲哚美辛組鞘內(nèi)注射PAF 30 min后測PWMT和PWTL值。各組大鼠痛閾測定結(jié)束后立即處死，取L4-6段脊髓組織，RT-PCR分析檢測ACSF組和PAF組大鼠脊髓環(huán)氧酶COX-1、COX-2和COX-3 mRNA表達(dá)，放射免疫分析檢測各組大鼠脊髓PGE2含量。
　　 2. 鞘內(nèi)注射PAF對(duì)脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活性和促炎性細(xì)胞因子表達(dá)的影響
　　 雄性Sprague-

10、Dawley大鼠64只隨機(jī)分為6組，鞘內(nèi)置管：人工腦脊液(ACSF)組，16只，鞘內(nèi)注射ACSF 10 μl；PAF組，16只，鞘內(nèi)注射PAF 5 μg；DMSO(二甲基亞砜)組，8只，腹腔注射0.1% DMSO生理鹽水2 ml，2 h后鞘內(nèi)注射PAF 5 μg；SC-514(10 mg/kg)組，SC-514(50 mg/kg)組和SC-514(100 mg/kg)組，每組8只，SC-514分別溶解于2 ml 0.1% DMSO生理鹽

11、水，腹腔注射給藥，2 h后鞘內(nèi)注射PAF 5 μg。PAF均溶解于10 μl ACSF。給藥前測PWMT和PWTL基礎(chǔ)值，鞘內(nèi)給藥后5 min、15 min、30 min、45 min、60 min、90min和120min各時(shí)間點(diǎn)測PWMT和PWTL值。各組大鼠痛閾測定結(jié)束后立即處死，取L4-6段脊髓組織，免疫組織化學(xué)染色檢測ACSF組和PAF組大鼠腰段脊髓GFAP和OX-42的表達(dá)，ELISA檢測各組大鼠脊髓TNF-α和IL-1β的

12、表達(dá)。
　　 3. 鞘內(nèi)注射PAF受體拮抗劑對(duì)SNI神經(jīng)痛大鼠鎮(zhèn)痛作用的研究
　　 雄性Sprague-Dawley大鼠64只，隨機(jī)分為6組：SNI組，16只，制作SNI疼痛模型；假手術(shù)組(sham組)，16只；DMSO(二甲基亞砜)組，8只，制作SNI疼痛模型，鞘內(nèi)注射0.1% DMSO生理鹽水5 μl；BN52021(100 μg)組，BN50730(100 μg)組和BN52021(100 μg)+BN50730(

13、100 μg)組，每組各8只，制作SNI疼痛模型，鞘內(nèi)注射給藥，PAF受體拮抗劑BN52021和BN50730溶解于5 μl 0.1% DMSO生理鹽水。DMSO組和拮抗劑治療組每天鞘內(nèi)注射給藥一次，連續(xù)給藥7 d。第7 d測各組大鼠PWMT值，隨后處死大鼠取L4-6段脊髓，免疫組織化學(xué)染色檢測各組大鼠脊髓c-fos表達(dá)，放射免疫分析檢測sham組和SNI組大鼠脊髓PAF含量。
　　 4. 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 所有數(shù)據(jù)以均

14、數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s)表示，采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件包分析。兩組間比較采用非配對(duì)t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，繼之以Fisher's PLSD多重比較法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 研究結(jié)論：
　　 1.鞘內(nèi)注射PAF誘發(fā)大鼠觸覺異常痛敏和輻射熱痛敏，環(huán)氧酶COX-2的激活和表達(dá)增強(qiáng)以及PGE2的產(chǎn)生參與其機(jī)制。
　　 2.鞘內(nèi)注射PAF誘發(fā)大鼠觸覺異常痛敏和輻射熱痛敏，膠質(zhì)細(xì)胞和NF-κB通