硼替佐米或聯(lián)合三氧化二砷誘導jurkat細胞凋亡實驗研究和livin mRNA表達的影響.pdf

1、目的：針對目前臨床對常規(guī)化療反應差，容易早期發(fā)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)白血病，出現(xiàn)難治復發(fā)的T細胞性急性淋巴細胞白血?。═-ALL），選用新型靶向抗腫瘤藥物硼替佐米單用或聯(lián)合三氧化二砷對該類白血病的jurkat細胞株進行凋亡實驗研究，并從基因水平探討其凋亡機制，進而為臨床治療 T-ALL開辟一條新途徑提供實驗依據(jù)。
　　方法：將處于對數(shù)增長期的jurkat細胞株，經(jīng)5-25nmol/L硼替佐米單獨或聯(lián)合三氧化二砷處理24小時，采用 MTT法

2、檢測檢測細胞增殖活性，并計算出 IC50值；選取 IC50值前后各藥物濃度刺激細胞株24小時后采用流式細胞儀檢測細胞凋亡，同時采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)檢測各藥物濃度對該細胞中凋亡抑制基因—livin基因的抑制情況。
　　結(jié)果：5-25nmol/L硼替佐米對 jurkat細胞增殖均有一定抑制作用，隨著濃度增加抑制作用逐漸增

3、強其中24h IC50劑量為12.7nmol/L，其中20 nmol/L劑量作用24h達最大抑制效果，繼續(xù)增加劑量抑制效果無顯著增強（P<0.05）。三氧化二砷濃度為:5-25umol/L,分別處理 jurkat細胞后也顯示出明顯的劑量依耐性抑制效應，其中24h IC50劑量為16.6umol/L，故選擇15 umol/L三氧化二砷與不同濃度的硼替佐米聯(lián)合。結(jié)果顯示，達到最大抑制濃度前，聯(lián)合處理組對細胞的抑制作用比同劑量兩藥任一種單獨使

4、用時都顯著增強（P<0.01）。流式細胞儀檢測對照組經(jīng)培養(yǎng)24h后細胞無明顯凋亡，而硼替佐米單藥組5 nmol/L、10 nmol/L、15 nmol/L處理24h的jurkat細胞較對照組顯示明顯凋亡，凋亡率分別是：（19.18±0.14）％、（27.97±0.53）%、（41.92±0.33）%，且隨著濃度增加凋亡率增加（P<0.01）；選擇15 umol/L三氧化二砷與硼替佐米5 nmol/L、10 nmol/L、15 nmol/

5、L聯(lián)合處理24h的jurkat細胞凋亡明顯比單藥處理組強，凋亡率分別是：（35.42±0.29）%、（47.12±0.64）%、（57.11±0.53）%（P<0.001）。各組細胞分別經(jīng)藥物作用24h后，硼替佐米組均能下調(diào) jurkat細胞 livin mRNA的表達，與對照組相比差異明顯（P<0.01）；硼替佐米單藥組與聯(lián)用組不同干預濃度之間均有差異，且隨著藥物濃度的增加，livin mRNA的表達逐漸降低（P<0.01）；同一時點