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1、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文MicrNA1和micrNA2抑制肺癌細(xì)胞侵襲和粘附的生物學(xué)作用研究姓名:劉文揚(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:博士專業(yè):臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師:宋詠梅王綠化20090601AbstractBackgroundandobjectiveMicroRNAs(miRNAs)aresmallnoncodingRNAgeneproductsapproximately1922nucleotidesinglestrandeclRNAsthatale
2、foundindiverseorganismsregulatinggenesbyeitherinducingmRNAdegradationorinhibitingtranslationwhichhencehavebeenimplicatediuseveralcellularprocessesincludingproliferationdifferentiationapoptosisanddevelopmentTodate,botllin
3、vivoandinvitrostudiesoflungcancerdemonstrateadysregulationofmiRNAexpressionandsuggestitsimportanceinthepathogenesisoflungcancerRecentlyinsmallcelllungcancer(SCLC)patients,wehaveidentifiedthatpatients、jlrinlhighexpression
4、levelofmiR1andmiR2havebetteroverfllsurvivalsandprogressivefreesurvivalscomparedtothelow—expresionlevelpatients,andthis2miRNAsignatureisanindependentpredictorofprognosisforSCLCpatientsThisworkwasaimedtoinvestigatetheeffec
5、tofoverexpressedmiR1andmiR2onthephenotypeoflungcancercelllinesinvitroMethodsSCLCcelllineNCIH446andNSCLCeelllineNCIH1299weretransienttransfectedwithchemicallysynthesizedmaturemiR1andmiR2mimicoligonucleotidesbylipofeeatami
6、ne2000At48haftertransfection,wecarriedoutthevalidationofexpressionlevelforeachmiRNAincelllinesbyrealtimeRT—PCRAt24haftertransfectiontheproliferationassayWaScarriedoutbymanualcellcounting;theprecoatedmatrigeltransweNmodel
7、wasusedfortheinvasionassay;thecellmatrixadhesionassayWasusedtocomparetheadhesiveabilitybetweeneachcelllineandcorrespondingcontrol、析tllprecoatedfibernectin96wellplate;flowcytometryWasusedtoanalyzethedistributionofcelIcycl
8、e麗mPIstainingAt24haftertamsfection,thesecellsweretreated嘶mcisplatinfor24handthenfloweytometrywitllPIstainingWasemployedtoanalyzecellapoptosisResultsHereweshowthatat48haftertransfectiontheexpressionlevelofmiR一1andmiR2inNC
9、IH446andNCIH1299celllineswereallsignificantlyupregulatedIninvitroinvasionassaythepercentageofinvadedcellnumberfromNCIH446andNCI—H1299cellswitlltransientoverexpressedmiR1miR2ormiR1/miR2relativetotheinvadednumberfromcorres
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