MicroRNA-7靶定XIAP抑制宮頸癌細胞的增殖和促進細胞的凋亡.pdf

1、[研究目的]微小RNA(microRNA，miRNA)是一類長度約19-25nt的小分子非編碼RNA，通過負性調(diào)節(jié)其靶基因的表達水平參與多種生理、病理過程。近年的研究表明，許多miRNA具有癌基因或抑癌基因活性，在腫瘤發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用。前期我們用Real Time PCR發(fā)現(xiàn)在與正常癌旁組織相比人宮頸癌組織中miR-7表達水平發(fā)生明顯下調(diào)。在上述基礎(chǔ)上，本研究旨在深入研究miR-7對HeLa和C-33A細胞生長表型的影響，進

2、一步確定miR-7直接作用的靶基因，從而闡明miR-7在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中作用的可能分子機制。
　　 [研究方法]在宮頸癌細胞中過表達miR-7，利用MTT、細胞集落形成及凋亡實驗檢測細胞增殖和凋亡的變化。之后綜合利用生物信息學方法和BLAST方法預測出miR-7的候選靶基因，并利用熒光報告載體實驗驗證miR-7對其靶基因的直接調(diào)控作用。通過Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測宮頸癌HeLa和C-33A細

3、胞過表達miR-7后靶基因mRNA水平和蛋白水平的表達變化，進一步確定miR-7對靶基因的調(diào)控作用。最后，用過表達質(zhì)?；蚯媒蒂|(zhì)粒改變XIAP的表達水平后，利用MTT實驗、細胞集落形成實驗和TUNEL實驗檢測細胞增殖和凋亡的變化，進一步研究靶基因的功能。
　　 [研究結(jié)果]在宮頸癌HeLa和C-33A細胞中，過表達miR-7后，細胞活性均明顯受抑制，并且集落形成能力和生長能力均明顯降低，在HeLa細胞中過表達miR-7細胞凋亡增加

4、。靶基因篩選結(jié)果表明，XIAP(X-linked inhibitor of apoptosisprotein)3'UTR區(qū)包含miR-7的潛在結(jié)合位點。熒光報告載體實驗表明miR-7能夠通過作用于XIAP基因的3'UTR區(qū)的特定位點對其表達進行負性調(diào)節(jié)。而在miR-7過表達的HeLa和C-33A細胞中，XIAP基因的mRNA表達水平和蛋白表達水平都有明顯下降。沉默HeLa和C-33A細胞中XIAP基因的表達后，細胞活性及增殖能力均明顯受