蘭索拉唑通過抑制幽門螺桿菌誘導(dǎo)的NF-κB和Akt激活下調(diào)胃上皮細(xì)胞表達(dá)COX-2.pdf

1、目的：研究蘭索拉唑（LPZ）在體外對幽門螺桿菌(Hp)感染胃上皮細(xì)胞后誘導(dǎo)表達(dá)環(huán)氧化酶2（COX-2）及前列腺素 E2（prostaglandin，PG）的影響，同時，觀察該效應(yīng) LPZ處理前后是否與核因子κB（NF-κB）和Akt通路的改變有關(guān)，從而了解LPZ潛在的免疫調(diào)控作用及其分子機(jī)制。
　　方法：采用RPMI-1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)胃上皮細(xì)胞系A(chǔ)GS，并根據(jù)不同的實驗?zāi)康姆譃?組：（1）空白對照組：僅給予0.1％ DMSO

2、；（2）Hp感染組：用感染復(fù)數(shù)（MOI）為100的Hp感染細(xì)胞24h；（3）LPZ干預(yù)組：Hp感染前加入0～100μmol/L LPZ作用3h，100 MOI的Hp感染24h。乳酸脫氫酶實驗篩選LPZ的最大作用濃度；（4）NF-κB抑制劑PDTC干預(yù)組：Hp感染前加入PDTC作用30 min，100 MOI的Hp感染24h；（5）PI3K抑制劑LY294002干預(yù)組：Hp感染前加入LY294002作用30 min，100 MOI的Hp感

3、染24h。實時定量PCR和Western blot分別檢測處理前后COX-2的mRNA和蛋白的表達(dá)；ELISA檢測PGE2分泌水平。提取細(xì)胞核蛋白與胞漿蛋白，Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)NF-κB和Akt的激活情況。
　　結(jié)果：
　?。?）與對照組AGS細(xì)胞相比，Hp感染后AGS細(xì)胞COX-2 mRNA及蛋白表達(dá)水平顯著增高；LPZ（100μmol/L）、NF-κB抑制劑PDTC和PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理均

4、可明顯降低Hp誘導(dǎo)的COX-2 mRNA及蛋白表達(dá)水平。
　?。?）與對照組AGS細(xì)胞相比，Hp感染后AGS細(xì)胞PGE2含量顯著增高； LPZ（100μmol/L）預(yù)處理可明顯降低Hp誘導(dǎo)的PGE2分泌。同樣，PDTC和LY294002也能抑制Hp誘導(dǎo)的PGE2的產(chǎn)生。
　?。?）Western blot結(jié)果顯示，Hp感染能誘導(dǎo)AGS細(xì)胞NF-κB p65亞基核轉(zhuǎn)位，而LPZ預(yù)處理后細(xì)胞核內(nèi)p65亞基含量明顯減少。此外，Hp