2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:
  通過外源加入不同濃度VEGF-A(vascular endothelial growth factor A)和內(nèi)源轉(zhuǎn)染VEGF-A質(zhì)粒兩個方面研究VEGF對人肝癌PLC細胞遷移、侵襲及體外形成血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry,VM)能力的影響。
  方法:
  1.選取人肝癌細胞系PLC,37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。實驗分為:正常對照組和加入不同濃度(10μg/L、30μ

2、g/L、60μg/L、100μg/L)VEGF-A組;
  2.利用劃痕實驗觀察加入不同濃度VEGF-A誘導人肝癌PLC細胞后,細胞遷移能力的變化;
  3.利用Transwell侵襲實驗觀察加入不同濃度VEGF-A誘導人肝癌PLC細胞后,細胞侵襲能力的變化;
  4.明膠酶譜實驗檢測加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞基質(zhì)金屬蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基質(zhì)金屬

3、蛋白酶9(Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)活性的變化;
  5.三維培養(yǎng)觀察加入不同濃度VEGF-A后各組肝癌細胞體外形成三維管道能力的變化;
  6.Western blot檢測加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞內(nèi)皮鈣黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)表達的變化;
  7.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(reverse trans

4、cription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞VE-cadherin mRNA表達水平的變化;
  8.瞬時轉(zhuǎn)染VEGF質(zhì)粒進入人肝癌PLC細胞,Western blot驗證轉(zhuǎn)染效果;
  9.劃痕實驗觀察轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞遷移能力的變化;
  10.Transwell實驗觀察轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞侵襲能力的變化;<

5、br>  11.明膠酶譜實驗觀察轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達活性的變化;
  12.三維培養(yǎng)觀察轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞體外形成三維管道能力的變化;
  13.Western blot檢測轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞VE-cadherin表達的變化;
  14.RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染VEGF后人肝癌PLC細胞VE-cadherin mRNA表達的變化。
  結(jié)果:<

6、br>  1.遷移實驗結(jié)果顯示,加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞向劃痕中央遷移的距離明顯大于正常對照組(P<0.05),并呈劑量依賴性;
  2.Transwell實驗結(jié)果顯示,加入不同濃度VEGF-A組的PLC細胞穿膜數(shù)明顯多于正常對照組(P<0.05);
  3.明膠酶譜實驗結(jié)果顯示,加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9表達活性增強(P<0.05),并呈劑量依賴性;

7、r>  4.三維培養(yǎng)結(jié)果顯示,加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞形成管道能力明顯增強,VEGF-A的濃度與管道數(shù)量之間呈顯著正相關(guān)(r=0.929);
  5.Western blot和RT-PCR結(jié)果顯示加入不同濃度VEGF-A后人肝癌PLC細胞的VE-cadherin表達均增強(P<0.05);
  6.Western blot驗證轉(zhuǎn)染VEGF質(zhì)粒后的人肝癌PLC細胞VEGF蛋白的表達明顯上調(diào)(P<0.05);<

8、br>  7.轉(zhuǎn)染VEGF后,肝癌PLC細胞向劃痕中央遷移的距離明顯大于正常對照組(P<0.05):
  8.Transwell結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染VEGF組的PLC細胞穿膜數(shù)明顯多于正常對照組(P<0.05):
  9.轉(zhuǎn)染VEGF質(zhì)粒后,明膠酶譜實驗檢測肝癌PLC細胞表達基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9的活性增強(P<0.05);
  10.三維培養(yǎng)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染VEGF后,肝癌PLC細胞能形成明顯的三維管道,而未轉(zhuǎn)染

9、組沒有管道形成;
  11.Western blot和RT-PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染VEGF后PLC細胞VE-cadherin的表達明顯增強(P<0.05)。
  結(jié)論:
  VEGF能增強人肝癌PLC細胞的遷移、侵襲能力和VM形成能力,VEGF是肝癌VM形成中的重要調(diào)控分子,其機制可能是通過上調(diào)MMPs和VE-cadherin促進肝癌VM的形成,使腫瘤組織形成多樣化的局部微循環(huán),促進腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移。本實驗為肝癌的抗血管治療

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