TGF-β1對(duì)大鼠脂肪干細(xì)胞體外軟骨形成能力影響的研究.pdf

1、目的：本文研究大鼠脂肪干細(xì)胞(adipose-derived stem cellsADSCs)在體外分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化成軟骨細(xì)胞的能力,初步觀察不同濃度的TGF-β1對(duì)其增殖、分化成軟骨細(xì)胞的影響,為軟骨組織工程及臨床應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：從3周齡SD大鼠腹股溝脂肪墊分離出脂肪組織,通過(guò)Ⅰ型膠原酶消化法分離干細(xì)胞,接種于含有胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中分離傳代。每日以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)情況。取第三代脂肪干細(xì)胞分

2、成5組,包含1個(gè)對(duì)照組(培養(yǎng)液為人脂肪干細(xì)胞完全培養(yǎng)基:高糖DMEM、10％胎牛血清、50nmol/L抗壞血酸、6.25mg/L胰島素、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素、100nmol/L地塞米松,不含TGF-β1)和4個(gè)TGF-β1濃度組(濃度分別是1、10、40、80μg/L加入脂肪干細(xì)胞完全培養(yǎng)基)。采用MTT比色法進(jìn)行分化和增殖活性比較,Ⅱ型膠原免疫細(xì)胞化學(xué)染色和細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)成軟骨細(xì)胞分化情況。
　　

3、 結(jié)果：原代細(xì)胞接種4-6小時(shí)后即可見(jiàn)沉降貼壁,7-8天左右可見(jiàn)大量增殖,按一定方向性排列呈漩渦狀或束狀,傳代后細(xì)胞增殖迅速,生長(zhǎng)穩(wěn)定。成軟骨誘導(dǎo)后行細(xì)胞甲苯胺藍(lán)染色示:10μg/LTGF-β1濃度組陽(yáng)性,40μg/LTGF-β1濃度組和80μg/LTGF-β1濃度染色較淡,染色細(xì)胞少,0μg/LTGF-β1濃度組和1μg/LTGF-β1濃度組為陰性。Ⅱ型膠原免疫組織化學(xué)染色顯示:10μg/L TGF-β1濃度組陽(yáng)性；40μg/LTGF