LPS通過TLR4上調THP-1細胞SR-PSOX的表達及其對脂質的吞噬.pdf

1、目的:研究TLR4與SR-PSOX之間的關系,探討LPS促動脈粥樣硬化的可能機制。
　　方法:THP-1細胞經160nmol/L佛波酯孵育24小時,誘導成貼壁的巨噬細胞后,加入不同處理因素。實驗1,用0ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml的LPS處理 THP-1細胞,逆轉錄聚合酶鏈反應（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-P

2、CR)檢測細胞 SR-PSOXmRNA表達,選出 LPS最佳作用濃度;再以最佳濃度LPS分別孵育THP-1細胞0h,3 h,6 h,12 h,24 h,RT-PCR法檢測細胞SR-PSOXmRNA表達,選出LPS最佳作用時間。實驗2,根據實驗目的分為兩部分:(1)經不同因素處理后,檢測THP-1細胞SR-PSOX表達情況,實驗分為PBS組,LPS組,IgG+LPS組,TLR4抗體+LPS組。10ug/ml抗體預處理THP-1細胞2小時,

3、LPS孵育細胞3小時,應用RT-PCR和Western Blot檢測細胞SR-PSOXmRNA及蛋白質表達;(2)經不同因素處理后,檢測細胞內脂質蓄積情況,實驗分為 oxLDL組,LPS+oxLDL組,IgG+LPS+oxLDL組,TLR4抗體+LPS+oxLDL組,10ug/ml抗體預處理THP-1細胞2小時,LPS孵育細胞3小時,再與30μg/mloxLDL孵育24小時,高效液相色譜法與油紅O染色觀察細胞內脂質含量。實驗3,根據實驗

4、目的分為兩部分,(1)經不同因素處理后,檢測THP-1細胞TLR4表達情況,實驗分為PBS組,LPS組,IgG+LPS組,SR-PSOX抗體+LPS組,2ug/ml抗體預處理THP-1細胞2小時,LPS孵育細胞3小時,應用RT-PCR法和Western Blot檢測細胞TLR4mRNA與蛋白質表達情況。(2)經不同因素處理后,檢測細胞內脂質蓄積情況,實驗分為oxLDL組,LPS+oxLDL組,IgG+LPS+oxLDL組,SR-PSOX

5、抗體+LPS+oxLDL組,2ug/ml抗體預處理 THP-1細胞2小時,LPS孵育細胞3小時,再與30ug/ml oxLDL孵育24小時,高效液相色譜法與油紅O染色觀察細胞內脂質含量。
　　結果:LPS上調SR-PSOX的mRNA表達,最佳作用濃度為100ng/ml,最佳作用時間為3小時。應用TLR4抗體封閉其功能后,SR-PSOXmRNA和蛋白表達下調,與LPS組相比,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05);油紅O染色細胞內紅染脂滴

6、減少,高效液相顯示脂質含量降低,與LPS+oxLDL組相比,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。應用SR-PSOX抗體封閉其功能后,TLR4的mRNA及蛋白表達與阻斷前相比均有一定程度降低,但差異無統(tǒng)計學意義;高效液相色譜與油紅O染色均表明細胞內脂質含量減少,與LPS+oxLDL組相比,差異有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。
　　結論:1.LPS刺激可以上調THP-1細胞SR-PSOX的表達;用TLR4抗體后,LPS上調THP-1細胞S