tBHQ通過(guò)Nrf2-HO-1信號(hào)途徑上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá).pdf

1、背景與目的：叔丁基對(duì)苯二酚（tBHQ）是一種合成的多酚類(lèi)抗氧化劑，在體內(nèi)能激活紅系衍生的核因子相關(guān)因子2（Nrf2）。血紅素氧合酶-1（HO-1）是 Nrf2的靶基因，研究顯示Nrf2/HO-1的激活有抗炎抗氧化及防止動(dòng)脈粥樣硬化(As)發(fā)生的作用。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）是一種重要的膜蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)體，能介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，減少泡沫細(xì)胞形成，發(fā)揮抗As的作用。但tBHQ與ABCA1表達(dá)之間是否存在聯(lián)系尚不清楚。本研究選取T

2、HP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞為研究對(duì)象，探討tBHQ對(duì)ABCA1表達(dá)，以及細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出的影響，并研究其作用的主要機(jī)制。
　　方法：用ox-LDL誘導(dǎo)形成THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞，以此細(xì)胞模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：實(shí)時(shí)定量PCR和Western blot方法檢測(cè)不同濃度tBHQ（0,25,50,100,200μM）處理細(xì)胞24 h及tBHQ處理不同時(shí)間（0,6,12,24,48 h）后ABCA1的表達(dá)情況，高效液相色譜檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇

3、含量，液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)細(xì)胞膽固醇流出；外源性加入calpain處理細(xì)胞，觀(guān)察tBHQ對(duì)細(xì)胞內(nèi)ABCA1蛋白水平的影響，轉(zhuǎn)染siRNA或加入相應(yīng)抑制劑抑制Nrf2或HO-1表達(dá)，用Western blot方法檢測(cè)tBHQ處理24 h后ABCA1等的表達(dá)情況，calpain活性試劑盒檢測(cè)calpain活性。
　　結(jié)果：tBHQ以時(shí)間及劑量依賴(lài)性上調(diào)細(xì)胞內(nèi) ABCA1蛋白水平及膽固醇流出（P<0.05），但對(duì)其mRNA水平無(wú)顯著影響。

4、進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)tBHQ能劑量依賴(lài)性降低calpain的活性（P<0.05），而加入外源性的calpain，ABCA1蛋白水平明顯下降，加入tBHQ則能顯著延緩ABCA1的蛋白降解（P<0.05）。采用HO-1抑制劑或轉(zhuǎn)染siRNA抑制HO-1表達(dá)，tBHQ上調(diào)ABCA1蛋白表達(dá)及抑制calpain活性的作用隨之取消（P<0.05），加入Nrf2 siRNA也觀(guān)察到類(lèi)似結(jié)果，說(shuō)明Nrf2和HO-1在tBHQ調(diào)節(jié)ABCA1蛋白水平中發(fā)揮重要