Apelin-13通過(guò)激活PKCα上調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞ABCA1的表達(dá).pdf

1、目的：Apelin家族（包括apelin-13）是孤兒G蛋白偶連受體APJ的配體，是新近發(fā)現(xiàn)的一種脂肪因子，具有血管保護(hù)及抗炎的作用。有研究發(fā)現(xiàn)PKC可能參與apelin細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的傳導(dǎo)。三磷酸腺苷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1（ABCA1）作為一種重要的膽固醇轉(zhuǎn)運(yùn)體，能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出，減少泡沫細(xì)胞形成，起到抗動(dòng)脈粥樣硬化的作用。但是apelin對(duì)ABCA1是否具有調(diào)節(jié)作用尚不清楚。本研究選取 THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞作為研究對(duì)象，探

2、討 apelin-13對(duì)胞內(nèi)ABCA1表達(dá)及其介導(dǎo)的膽固醇流出的影響及其機(jī)制。
　　方法：選取ox-LDL誘導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞為主要研究對(duì)象，觀察不同濃度apelin-13(0,1,10,100,1000 nM)及其處理細(xì)胞不同時(shí)間（0,6,12,24,48h）后，細(xì)胞內(nèi)ABCA1表達(dá)情況。油紅O染色及高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量，液體閃爍計(jì)數(shù)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出情況。實(shí)時(shí)定量 PCR檢測(cè)ABCA1 mRN

3、A水平。Western blot檢測(cè)ABCA1、PKC及磷酸化PKC蛋白水平。Calpain活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)calpain的活性。用apelin活性抑制劑PTX、PKC抑制劑或用轉(zhuǎn)染PKCα siRNA對(duì)apelin-13作用下的細(xì)胞共處理24 h，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ABCA1、磷酸化ABCA1水平及calpain活性，并觀察對(duì)膽固醇流出的影響。
　　結(jié)果：Apelin-13以時(shí)間及劑量依賴性上調(diào) ABCA1的蛋白表達(dá)，但對(duì)其 mRNA

4、 水平無(wú)顯著影響。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)apelin-13通過(guò)磷酸化ABCA1及抑制calpain的活性，減少ABCA1蛋白降解，從而增加細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出；用 PKC抑制劑預(yù)處理或轉(zhuǎn)染PKCα的小干擾RNA，apelin-13對(duì)細(xì)胞內(nèi)ABCA1蛋白、ABCA1磷酸化水平及calpain活性等的影響隨即取消。
　　結(jié)論：在THP-1巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞中，apelin-13通過(guò)激活PKCα抑制calpain活性，并磷酸化ABCA1