薯蕷皂苷元通過(guò)抑制PI3K-AKT下調(diào)LPL表達(dá)影響THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積.pdf

1、目的:
　　薯蕷皂苷元是藥物維奧欣的有效藥用成分，其含量為99.4％，具有抗腫瘤、抗感染、抗淋巴白血病、抗心血管疾病等功效，并可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝的作用。同時(shí)，已有臨床報(bào)道，薯蕷皂苷元具有延緩動(dòng)脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）斑塊形成的作用，但其相關(guān)機(jī)制尚未闡明。研究表明，巨噬細(xì)胞表達(dá)的脂蛋白脂酶(lipoproteinlipase, LPL)通過(guò)促進(jìn)其脂質(zhì)蓄積而具有致As作用。提示薯蕷皂苷元可能通過(guò)下調(diào)巨噬細(xì)胞LP

2、L表達(dá)而具有抗 As作用。因此，本項(xiàng)目通過(guò)研究薯蕷皂苷元對(duì) THP-1巨噬細(xì)胞 LPL表達(dá)的影響，來(lái)探究薯蕷皂苷元抗動(dòng)脈粥樣硬化機(jī)制，以期為薯蕷皂苷元抗As的研究提供一定的理論指導(dǎo)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，并為As的防治提供新的思路。
　　方法
　?。?）THP-1細(xì)胞的培養(yǎng)以及誘導(dǎo)分化：首先選用含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液對(duì)THP-1細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，再使用160 nmol/L佛波酯孵育THP-1細(xì)胞至24h，使THP-1細(xì)

3、胞誘導(dǎo)分化成為巨噬細(xì)胞。（2）MTT法探索實(shí)驗(yàn)中薯蕷皂苷元的最佳處理濃度：選取不同濃度的薯蕷皂苷元處理已誘導(dǎo)分化的THP-1巨噬細(xì)胞24h，再采用MTT法檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞的細(xì)胞活力，從而進(jìn)一步確定薯蕷皂苷元最佳處理濃度。（3）PCR和Western Blot檢測(cè)經(jīng)薯蕷皂苷元處理不同時(shí)間的THP-1巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)變化情況，以確定薯蕷皂苷元最佳處理時(shí)間。（4）采用油紅 O染色法檢測(cè)經(jīng)不同處理因素處理的THP-1巨噬細(xì)胞的脂質(zhì)含量

4、：通過(guò)觀察薯蕷皂苷元在經(jīng)不同處理因素處理前后THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)含量以明確薯蕷皂苷元對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響；通過(guò)觀察薯蕷皂苷元對(duì)經(jīng)LPL siRNA處理的THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)含量的影響，以進(jìn)一步確定薯蕷皂苷元對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積的影響是否是經(jīng)LPL發(fā)揮作用。（5）PCR和Western Blot檢測(cè)經(jīng)LPL siRNA或PI3K抑制劑LY294002處理后薯蕷皂苷元對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞LPL表達(dá)的影響，Weste

5、rn Blot檢測(cè)p-PI3K/ PI3K、p-AKT/AKT、p-CREB/ CREB蛋白量以探究薯蕷皂苷元對(duì)PI3K/AKT信號(hào)途徑的影響。
　　結(jié)果:
　　THP-1細(xì)胞經(jīng)160 nmol/L佛波酯孵育24h后成功誘導(dǎo)分化成THP-1巨噬細(xì)胞。薯蕷皂苷元可顯著性下調(diào)THP-1巨噬細(xì)胞LPL的表達(dá)，且其最佳處理濃度和時(shí)間分別為20μmol/L、24h。并發(fā)現(xiàn)薯蕷皂苷元可降低THP-1巨噬細(xì)胞脂質(zhì)蓄積，但薯蕷皂苷元對(duì)經(jīng)LP