痤瘡的流行病調(diào)查及中醫(yī)分型和積雪甙對(duì)造模大鼠炎癥結(jié)節(jié)作用機(jī)理探討.pdf

1、本課題主要包括兩個(gè)方面的內(nèi)容：1痤瘡的流行病調(diào)查及中醫(yī)分型；2積雪甙對(duì)造模大鼠局部炎癥結(jié)節(jié)的作用機(jī)理。 第一部分：痤瘡的流行病調(diào)查及中醫(yī)分型 目的： 本課題主要通過(guò)流行病調(diào)查研究的方法，探討?zhàn)畀彽闹嗅t(yī)分型以及誘導(dǎo)或加重痤瘡的危險(xiǎn)因素，進(jìn)一步了解中國(guó)痤瘡流行病發(fā)展趨勢(shì)，為指導(dǎo)臨床治療提供理論幫助。 研究方法： 本課題采用流行病學(xué)方法，設(shè)計(jì)統(tǒng)一的流行病調(diào)查表，收集武漢市第一醫(yī)院每周痤瘡專(zhuān)科門(mén)診的痤瘡患

2、者的資料，采用醫(yī)學(xué)統(tǒng)計(jì)方法對(duì)調(diào)查對(duì)象的性別、年齡、皮膚類(lèi)型、精神狀態(tài)、睡眠時(shí)間、女性月經(jīng)與痤瘡的關(guān)系以及中醫(yī)辨證分型進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，最后得出結(jié)論。 結(jié)果： 1.2558例痤瘡患者中，女性1748例，男性810例，就診患者中以女性多見(jiàn)，發(fā)病年齡以青春期為主，男性發(fā)病年齡集中在15-20歲的年齡段，女性患者的發(fā)病年齡集中在小于15歲的年齡段。 2.油性皮膚的痤瘡患者最為多見(jiàn)所占比例最大，其次為中性皮膚、混合性皮膚、干

3、性皮膚。 3.2558例痤瘡患者中，精神緊張的痤瘡患者1619例，占63.29％，認(rèn)為與痤瘡發(fā)病相關(guān)的占30.70％；無(wú)精神緊張的患者939例，占36.71％。 4、經(jīng)常熬夜的患者所占比例為21.85％，偶爾熬夜的患者占42.65％，認(rèn)為與痤瘡發(fā)病相關(guān)的占49.27％；不熬夜的患者所占比例為35.50％。 5.2558例痤瘡患者中，痰瘀結(jié)聚型最多，占37.57％，其后依次為肝氣郁結(jié)型，占28.03％，濕熱蘊(yùn)結(jié)型占

4、26.94％，肝腎陰虛型占6.53％，肺經(jīng)風(fēng)熱型占0.67％。男性痤瘡以痰瘀結(jié)聚型最為多見(jiàn)，青春期后女性患者以肝氣郁結(jié)型最為多見(jiàn)，青春期女性患者證型分布無(wú)明顯差別。 6.女性痤瘡患者中，痤瘡加重與月經(jīng)有關(guān)的為1103例，主要為月經(jīng)前痤瘡加重，占56.18％，其次為經(jīng)中加重，經(jīng)后加重。肝腎陰虛型與月經(jīng)的關(guān)系最密切。 結(jié)論： 1.2558例就診痤瘡患者中以青春期女性患者多見(jiàn)，發(fā)病年齡女性早于男性。 2.油性皮

5、膚、精神緊張、熬夜可能為誘發(fā)或加重痤瘡的危險(xiǎn)因素，女性患者多在月經(jīng)前痤瘡加重。 3.我科痤瘡門(mén)診的患者中，男性以痰瘀結(jié)聚型最為多見(jiàn)，青春期后女性患者以肝氣郁結(jié)型最為多見(jiàn)，青春期女性患者證型分布無(wú)明顯差別。 第二部分：積雪甙對(duì)造模大鼠局部炎癥結(jié)節(jié)的作用機(jī)理的探討 目的： 本研究擬從動(dòng)物模型中，探討積雪甙對(duì)炎癥后成纖維細(xì)胞作用機(jī)理，通過(guò)對(duì)光鏡和電鏡的觀察，了解在炎癥發(fā)展過(guò)程中成纖維細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)的改變，為積雪

6、甙在臨床廣泛應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1.預(yù)實(shí)驗(yàn)： 1.1分別用單純的痤瘡丙酸桿菌、不完全福氏佐劑、痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐劑造模。在造模后不給予藥物干預(yù)，觀察造模后各組大鼠局部組織的改變，并通過(guò)光鏡觀察不同時(shí)期的病理改變，從而確定炎癥反應(yīng)高峰期，成纖維細(xì)胞、膠原纖維在不同時(shí)期的改變情況以及三組模型中最佳的動(dòng)物模型。 1.2瘡丙酸桿菌培養(yǎng)：凍干痤瘡丙酸桿菌以腦心浸液復(fù)蘇后，室溫下放置數(shù)分鐘，取少許

7、溶液于哥倫比亞血平板，厭氧環(huán)境下35-37℃培養(yǎng)48-72小時(shí)，調(diào)整痤瘡丙酸桿菌濃度為2×1010/ml備用。并經(jīng)鏡下檢驗(yàn)觀察為藍(lán)色棒狀痤瘡丙酸桿菌。 1.3造模：大鼠背部皮膚備皮，約1×1cm大小，每只大鼠四處。痤瘡丙酸桿菌組將調(diào)整好濃度的痤瘡丙酸桿菌接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬(wàn)單位的細(xì)菌；不完全福氏佐劑組，將不完全福氏佐劑與生理鹽水以3：7的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml；痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐

8、劑，將不完全福氏佐劑與痤瘡丙酸桿菌以3：7的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬(wàn)單位的細(xì)菌。 2.實(shí)驗(yàn) 2.1痤瘡丙酸桿菌培養(yǎng)：同前2.2造模：大鼠背部皮膚備皮，約1×1cm大小，每只大鼠四處。將調(diào)整好濃度的痤瘡丙酸桿菌與不完全福氏佐劑以7：3的比例乳化后接種到大鼠皮下，每處0.1ml，約2000萬(wàn)單位的細(xì)菌。 2.3分組：將四十只大鼠隨機(jī)分為四組，積雪甙和阿奇霉素組、積雪甙組、阿奇霉素組、空白

9、對(duì)照組，每組十只。 2.4灌胃：于造模后第二天開(kāi)始灌胃，每只大鼠灌2ml，藥物濃度分別為：積雪甙和阿奇霉素組，積雪甙濃度為1.5mg/ml，阿奇霉素濃度為10.42mg/ml；積雪甙組，積雪甙濃度為0.75mg/ml；阿奇霉素組，阿奇霉素濃度為5.21mg/ml；空白對(duì)照組，0.9％生理鹽水。(《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)》湖北科學(xué)技術(shù)出版社) 2.5光鏡標(biāo)本制作及觀察：于造模后第20、30天切除大鼠造模組織，10％甲醛固定，按石蠟切片

10、常規(guī)處理，用腿染色，在光鏡下觀察。 2.6電鏡標(biāo)本制作及觀察：在造模后第20、30天切除大鼠皮膚，2.5％戊二醛前固定，1％鋨酸固定，梯度乙醇脫水，樹(shù)脂包埋，半薄切片定位，LKB2V型超薄切片機(jī)切片，日立H2600型透射電鏡觀察，觀察接種部位成纖維細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的變化。 結(jié)果: 1.預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果：三組模型比較發(fā)現(xiàn)，以痤瘡丙酸桿菌+不完全福氏佐劑的炎癥反應(yīng)、成纖維細(xì)胞、膠原纖維的改變最為明顯。不同時(shí)期的病理改變顯示

11、，造模后第10天炎癥反應(yīng)最劇烈；第20天成纖維細(xì)胞增殖，膠原纖維增多，排列致密最明顯；第30天各組炎癥反應(yīng)較輕甚至消失，但仍有成纖維細(xì)胞的增殖和膠原纖維增多增粗，較20天有減輕。 2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果 2.1光鏡結(jié)果：空白組膠原增生、增粗明顯，排列致密，30天較20天的改變不明顯。阿奇霉素組膠原改變較空白組稍輕，但同組前后比較改善不明顯，有積雪甙干預(yù)的膠原改變較空白組明顯要輕，同組前后對(duì)比，亦有明顯改善。 2.2電鏡結(jié)果

12、：空白對(duì)照組成纖維細(xì)胞增殖，凋亡，細(xì)胞體積變大，成纖維細(xì)胞體積增大，胞漿內(nèi)線粒體數(shù)目較多，腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張明顯，部分細(xì)胞核內(nèi)異染色質(zhì)明顯增多。阿奇霉素組成纖維細(xì)胞的胞漿改變較空白組輕。經(jīng)積雪甙干預(yù)的成纖維細(xì)胞胞漿改變較空白組明顯要輕，第30天時(shí)，成纖維細(xì)胞胞漿改變接近正常。 結(jié)論: 積雪甙通過(guò)抑制成纖維細(xì)胞過(guò)于活躍的生物學(xué)活性從而使其分泌膠原的功能下降，進(jìn)而起到抑制膠原增生的作用，減少了造模大鼠炎癥結(jié)節(jié)愈后留下纖維性