粉塵螨疫苗對粉塵螨變應原誘導的小鼠氣道變態(tài)反應炎癥的影響及其機制研究.pdf

1、目的：通過對哮喘模型小鼠鼻腔免疫標準化粉塵螨疫苗進行治療，探討標準化粉塵螨疫苗對粉塵螨變應原誘導的變態(tài)反應性氣道炎癥的免疫保護作用，探討標準化粉塵螨疫苗在支氣管哮喘抗原特異性免疫治療中的機制。 方法： 1、21只4～b周齡SPF級Balb/c 小鼠分成正常對照組、哮喘模型組、標準化粉塵螨疫苗治療組。正常對照組不做處理。用粉塵螨變應原提取液誘發(fā)哮喘制作哮喘小鼠模型，哮喘小鼠模型制作成功后用標準化粉塵螨疫苗(400μg)在小

2、鼠麻醉狀態(tài)下行鼻腔免疫，連續(xù)免疫8次，每次間隔1天，免疫結束1周以后，用50 μg/50 μl Der f變應原滴鼻激發(fā)，每天1次，連續(xù)7次。 2、各組小鼠氣管插管進行支氣管肺泡灌洗，觀察支氣管肺泡灌沈液(BALF)中細胞總數和細胞分類；各組小鼠取肺組織，通過HE染色(haematoxylin and eosin)觀察小鼠肺部炎癥變化。 3、各組小鼠用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)檢測血清中IgE、IgA和IgG2a抗體

3、；檢測肺泡灌洗液中IL-10、IL-4和IFN—γ水平；同時檢測脾細胞在變應原特異刺激下分泌的IL-10、IL-4和IFN—γ水平。 4、各組小鼠用MTT法檢測脾淋巴細胞增殖反應。 5、各組小鼠用流式細胞儀檢測脾淋巴細胞中的調節(jié)性T細胞數量。 6、各組小鼠均分別用PBS測基礎值，以1mg/ml、10mg/ml、30mg/ml、50mg/ml、100mg/ml濃度的乙酰甲膽堿激發(fā)，觀察氣道高反應性Penh值的變化。

4、 結果： 1、哮喘模型組小鼠激發(fā)后可見咳嗽、喘息、呼吸加深加快，煩躁不安等癥狀；標準化粉塵螨疫苗治療組激發(fā)后也可見類似癥狀和體征，但明顯減輕。 2、正常對照組小鼠肺部無病理改變；哮喘模型組肺部出現明顯的變態(tài)反應性炎癥；標準化粉塵螨疫苗治療組肺部變態(tài)反應性炎癥較哮喘模型組明顯減輕。哮喘模型組小鼠肺泡灌洗液細胞總數為(159.60±15.08)、嗜酸性粒細胞數為(33.20±3.76)；標準化粉塵螨疫苗治療組肺泡灌洗

5、液細胞總數為(101.00±5.32)、嗜酸性粒細胞數為(18.40±2.14)。哮喘小鼠在標準化粉塵螨疫苗治療后肺泡灌洗液細胞總數和嗜酸性粒細胞數都有所下降，標準化粉塵螨疫苗治療組與模型組比較有統計學意義(P＜0.01)。 3、哮喘模型組肺泡灌洗液中的IL-4、IL—10和IFN—γ分別為(57.30±5.02pg/ml)、(52.5±2.66pg/ml)和(53.80±1.00 pg/ml)，與之相比，標準化粉塵螨疫苗治療組

6、肺泡灌洗液中的IL-4、IL—10和IFN—γ分別為(32.00±4.42)、(135.25±1.04)、(117.00±8.43)，標準化粉塵螨疫苗治療組IL-4顯著降低(P＜0.01)，IL—1O和IFN—γ都顯著升高(P＜0.01)。 4、哮喘模型組脾細胞懸液中IL-10、IL-4和IFN—γ水平分別為(47.35±4.85)、(169.25±16.80)、(40.00±5.35)；標準化粉塵螨疫苗治療組脾細胞懸液中IL-

7、10、IL-4和IFN—γ水平分別為(65.75±5.33)、(83.25±3.71)、(76.00±7.12)；標準化粉塵螨疫苗治療組各參數與模型組比較有顯著差異(P＜0.01)。 5、與模型組相比，標準化粉塵螨疫苗治療組脾淋巴細胞增殖受到抑制(P＜0.01)。 6、與模型組相比，標準化粉塵螨疫苗治療組小鼠能明顯誘導調節(jié)性T細胞數量增加(P＜0.01)。 7、與模型組相比，標準化粉塵螨疫苗治療組小鼠治療后，氣道