CpG-ODN對哮喘小鼠體內(nèi)Th1-Th2失衡和氣道變態(tài)反應炎癥的影響.pdf

1、支氣管哮喘是多種細胞和細胞成分參與的氣道慢性炎癥疾病。Th細胞通過釋放多種細胞因子在整個炎癥反應中起著至關重要的作用。目前，Th1/Th2失衡被認為是支氣管哮喘主要的免疫學改變。 CpG-ODN是一類含有非甲基化胞嘧啶一鳥嘌呤核苷酸基序的寡聚核苷酸，具有較強的免疫調(diào)節(jié)作用。大量動物實驗顯示，小鼠在抗原致敏階段或在抗原激發(fā)之前給予CpG-ODN治療，能夠有效的抑制體內(nèi)Th1/Th2失衡，抑制變應原誘導的氣道EOS炎癥和氣道高反應性

2、。這提示CpG-DNA對預防小鼠哮喘模型的形成有一定的作用，為CpG-ODN能預防敏感個體接觸過敏原時產(chǎn)生哮喘反應提供了理論依據(jù)。我們利用OVA致敏和激發(fā)BALB/c小鼠建立哮喘動物模型，第一次激發(fā)24小時后腹腔注射CpG-ODN，觀察CpG-ODN在Th2優(yōu)勢應答已經(jīng)建立的情況下，是否能夠抑制哮喘小鼠體內(nèi)的Th1/Th2失衡和氣道內(nèi)變態(tài)反應性炎癥，評價其治療支氣管哮喘的潛在作用。 實驗方法： 32只BALB/c小鼠隨機

3、分成4組：正常對照組、哮喘模型組、CpG-ODN治療組和ODN對照組。哮喘模型組、CpG-ODN治療組和ODN對照組于第0、7、14和21天每只小鼠分別腹腔注射200微升的致敏液(含100微克的OVA和2.25毫克的免疫佐劑氫氧化鋁)致敏；隨后分別于第26和31天以1％的OVA溶液霧化吸入。正常對照組用氫氧化鋁腹腔注射和生理鹽水霧化吸入。 CpG-ODN治療組第一次激發(fā)24小時后腹腔注射100μg CpG-ODN： ODN對照

4、組腹腔注射100μg ODN；哮喘模型組和正常對照組腹腔注射100μl生理鹽水。最后一次激發(fā)24小時后處死小鼠。 1、氣管插管，用生理鹽水灌洗肺泡，收集BALF，4攝氏度下1000r/min離心10分鐘。取上清液凍存于-80度冰箱，待行ELISA檢測細胞因子濃度；沉渣用lmlHanks液重懸，吸取100μl用細胞計數(shù)板行細胞記數(shù)，觀察BALF中白細胞總數(shù)；另吸取細胞懸液200ul行細胞爬片，瑞氏染色，觀察EOS百分比及EOS絕對

5、值變化；取小鼠肺組織，固定后制備病理切片HE染色，觀察小鼠氣道內(nèi)炎癥變化。 2、取小鼠脾臟，制備脾單個核細胞懸液，在24孔培養(yǎng)板中進行細胞培養(yǎng)，每孔加入200微克OVA抗原。48個小時后提取脾單個核細胞培養(yǎng)上清液，凍存于-80度冰箱，待行ELISA檢測細胞因子濃度。 3、應用ELISA技術檢測BALF和脾單個核細胞培養(yǎng)上清液中Th2型細胞因子IL-4、IL-5及Th1型細胞因子IFN-γ濃度。 結(jié)論：抗原激發(fā)24