抗人IgM抗體對(duì)鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠成瘤及IgM、gp96蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的:盡管鼻咽癌的診斷和治療方法都在不斷進(jìn)步,但對(duì)其早期診斷與預(yù)后判斷還缺乏有效的手段,患者的5年生存率還有待進(jìn)一步提高；因而我們需要在鼻咽癌發(fā)病機(jī)制理論研究領(lǐng)域取得突破性進(jìn)展,尋找新的靶點(diǎn),以提高其早期診斷水平和整體治療效果。本實(shí)驗(yàn)通過研究抗人IgM抗體對(duì)鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長、腫瘤細(xì)胞凋亡以及免疫球蛋白M(IgM)、糖蛋白gp96(Glycoprotein96,gp96)表達(dá)的影響,以期探討IgM在鼻咽癌中異位表達(dá)的生物

2、學(xué)活性以及抗人IgM抗體影響裸鼠成瘤的可能機(jī)制。
　　 方法:對(duì)鼻咽癌HNE-1細(xì)胞進(jìn)行傳代培養(yǎng),制成細(xì)胞懸液,接種于Balb／c-nu／nu裸鼠右側(cè)背腹部皮下,建立鼻咽癌移植瘤模型；15只荷瘤裸鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(腹腔注射抗人IgM抗體,1.5mg／裸鼠,分5次,每隔3天1次)、IgG對(duì)照組(腹腔注射IgG抗體)及PBS對(duì)照組(腹腔注射PBS),同時(shí)觀察裸鼠移植瘤生長情況,定期(每四天)稱量裸鼠體重并以游標(biāo)卡尺測量移植瘤的長徑及

3、短徑,繪制腫瘤生長曲線,計(jì)算腫瘤體積=腫瘤長徑×腫瘤短徑2／2。5次腹腔給藥后觀察1周,處死裸鼠,取瘤體,稱量移植瘤重量,計(jì)算抑瘤率。常規(guī)HE染色觀察移植瘤光鏡下改變,并取裸鼠主要內(nèi)臟行HE染色。采用TUNEL技術(shù)檢測鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞凋亡情況,采用圖像分析系統(tǒng)計(jì)算凋亡指數(shù)；同時(shí)利用免疫組化SP法檢測裸鼠移植瘤組織中IgM、gp96蛋白的表達(dá)情況,同樣采用圖像分析系統(tǒng)作平均光密度值測定。
　　 結(jié)果:(1)

4、成功構(gòu)建出人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型,三組裸鼠均有鼻咽癌原位移植瘤生長,成瘤率100％；其瘤組織經(jīng)病理切片檢查證實(shí)為鼻咽癌,且在實(shí)驗(yàn)期內(nèi),三組動(dòng)物全部存活。(2)三組裸鼠飲食正常,活動(dòng)自如,精神狀態(tài)良好,無1只死亡；其心、肝、脾、肺、腎組織形態(tài)觀察無明顯差異。(3)抗人IgM抗體干預(yù)組裸鼠移植瘤體積為(26.73±16.51)mm3,較IgG對(duì)照組(204.97±151.88)mm3和PBS對(duì)照組(230.16±167.78)mm3明顯減小

5、,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；抗人IgM抗體干預(yù)組裸鼠體重為(21.10±2.35)g,而IgG對(duì)照組為(20.70±3.29)g,PBS對(duì)照組(20.01±2.22)g,三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；抗人IgM抗體干預(yù)組裸鼠移植瘤重量(0.09±0.07)g,較IgG對(duì)照組(0.35±0.10)g和PBS對(duì)照組(0.38±0.08)g明顯減小,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；同時(shí)計(jì)算抑瘤率分別為74

6、.45％和76.84％。(4)TUNEL法檢測鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤組織中細(xì)胞凋亡水平,抗人IgM抗體干預(yù)組腫瘤細(xì)胞平均凋亡指數(shù)為(1.50±0.76)％,較IgG對(duì)照組(0.49±0.15)％和PBS對(duì)照組(0.42±0.20)％明顯升高,三組間差異經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；(5)免疫組織化學(xué)SP法檢測裸鼠移植瘤組織中IgM、gp96蛋白表達(dá),抗人IgM抗體干預(yù)組IgM蛋白表達(dá)的平均光密度值為(0.01±0.0

7、1),與IgG對(duì)照組(0.06±0.03)和PBS對(duì)照組(0.05+0.03)相比均顯著下降,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；抗人IgM抗體干預(yù)組gp96蛋白表達(dá)顯著下降(0.05±0.01),經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析與IgG對(duì)照組(0.10±0.03)和PBS對(duì)照組(0.11±0.02)比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論:(1)抗人IgM抗體能顯著抑制人鼻咽癌HNE-1細(xì)胞裸鼠移植瘤生長,提示鼻咽癌異位表達(dá)的IgM