Mir-486-5p調(diào)控鼻咽癌HNE1細(xì)胞增殖及遷移的研究.pdf

1、[目的]
　　本論文旨在重點闡述miR-486-5p在鼻咽癌HNE1細(xì)胞增殖及細(xì)胞遷移中的作用及初步探討其機(jī)制，為發(fā)掘鼻咽癌治療新靶點提供實驗基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　利用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR-486-5p轉(zhuǎn)染至人鼻咽癌細(xì)胞株HNE1中，實時定量PCR法檢測轉(zhuǎn)染后miR-486-5p表達(dá)水平。CCK-8法檢測過表達(dá)miR-486-5p對鼻咽癌細(xì)胞增殖活性的影響。平板克隆方法檢測miR-486-5p對鼻咽癌細(xì)胞克隆形成

2、的能力。流式細(xì)胞術(shù)分析miR-486-5p對鼻咽癌細(xì)胞周期分布的影響。劃痕試驗檢測miR-486-5p對鼻咽癌細(xì)胞的遷移能力。用Western blot法檢測細(xì)胞周期和遷移相關(guān)蛋白的表達(dá)。
　　[結(jié)果]
　　(1)實時定量PCR結(jié)果證實miR-486-5p在鼻咽癌細(xì)胞系中低表達(dá)。與正常細(xì)胞NP69相比，在CNE2細(xì)胞是其(0.036±0.008)倍，在HNE1細(xì)胞是其(0.010±0.001)倍，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0

3、.05)。miR-486-5p mimics轉(zhuǎn)染的最佳條件是轉(zhuǎn)染終濃度為40nmol/L，轉(zhuǎn)染時間為48h。
　　(2)細(xì)胞生長曲線、平板克隆形成、流式細(xì)胞儀測定周期和Western blot結(jié)果表明，miR-486-5p通過下調(diào)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白CDK4和Cyclin D1的表達(dá)，上調(diào)p21Cip1、p27Kip1的表達(dá)，使鼻咽癌細(xì)胞阻滯在細(xì)胞周期G1期，抑制鼻咽癌細(xì)胞的增殖能力。轉(zhuǎn)染組細(xì)胞在轉(zhuǎn)染24 h和48 h后G1期細(xì)胞比例

4、明顯增多，分別由(37.22±1.53)％和(67.05±1.20)％增加至(49.70±0.84)％和(79.61±1.26)％，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(3)細(xì)胞劃痕實驗及Western blot結(jié)果表明，miR-486-5p通過下調(diào)遷移相關(guān)蛋白MMP2及MMP9的表達(dá)來抑制鼻咽癌細(xì)胞的遷移能力，MMP2蛋白在48h及72h分別降至(0.66±0.03)倍和(0.74±0.02)倍;MMP9蛋白在48h及7