抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤血管生成的影響及機制研究.pdf

1、目的:喉癌是來源于喉粘膜上皮組織的惡性腫瘤,最常見的為喉鱗狀細胞癌,約占全身惡性腫瘤的5.7％-7.6％,近年來其發(fā)病率逐漸增多。目前喉癌的治療方式仍以手術(shù)為主,輔以放、化療,雖然近年來原有的治療方法不斷改善,但是喉癌的治療效果仍不理想,但其5年生存率并未明顯提高。隨著各種生物學技術(shù)的發(fā)展,人們正積極尋找新治療方式和新的藥物來治療喉癌。近年來許多學者發(fā)現(xiàn)一些上皮來源的惡性腫瘤中存在免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)的表達

2、,這一現(xiàn)象已成為腫瘤免疫研究的一個熱點,并且可能為腫瘤的治療提供一個新的方向。腫瘤血管生成與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。而促血管生成因子的表達則是腫瘤血管生成的重要因素。本實驗通過研究抗人IgM抗體對喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤微血管密度(microvessel density, MVD)以及血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)、CD40蛋白表達的影響,以探討抗人IgM抗體抗腫瘤

3、血管生成的作用和可能的機制,從而為抗人IgM抗體應用于喉鱗癌的治療提供理論和實驗依據(jù)。方法:在本實驗小組的前期研究[補充劉蓓學位論文作為參考文獻]中我們已經(jīng)成功建立了喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤模型,將15只裸鼠隨機分為實驗組、IgG對照組和PBS對照組。實驗組移植瘤內(nèi)注射抗人IgM抗體,3天注射一次,每次每只注射0.3mg,一共注射五次, IgG組移植瘤內(nèi)注射羊IgG,注射量與注射方法與實驗組相同。PBS組移植瘤內(nèi)注射PBS液,注射

4、量與注射方法與實驗組相同。觀察裸鼠的生長情況,最后一次用藥后3天,處死裸鼠,取出移植瘤體,應用免疫組織化學技術(shù)檢測各種腫瘤組織中CD31標記的微血管密度(MVD)及VEGF、CD40蛋白表達,并采用圖像分析系統(tǒng)檢測VEGF及CD40的平均光密度。結(jié)果:(1)3組裸鼠移植瘤組織切片經(jīng)病理檢查證實為喉鱗癌,并且在實驗期內(nèi),15只裸鼠全部存活,無一死亡。(2)免疫組織化學SAP法檢測裸鼠移植瘤MVD,實驗組MVD為11.33±1.86, Ig

5、G對照組為15.92±2.17,PBS對照組為16.50±2.35,實驗組與兩個對照組比較MVD顯著下降,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(3)用免疫組織化學SABC法檢測裸鼠移植瘤組織中VEGF、CD40蛋白的表達,實驗組 VEGF蛋白表達的平均光密度值為0.216±0.013,IgG對照組為0.362±0.015,PBS對照組為0.377±0.018,實驗組與兩個對照組相比VEGF蛋白表達明顯下降,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)

6、計學意義(P<0.05)。(4)實驗組CD40蛋白表達的平均光密度值為0.171±0.013, IgG對照組為0.233±0.013,PBS對照組為0.237±0.014,實驗組較兩個對照組CD40蛋白表達明顯下降,經(jīng)統(tǒng)計學分析差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(5)各組腫瘤組織中MVD與VEGF、CD40蛋白表達呈正相關(guān)。結(jié)論:(1)抗人IgM抗體可以有效抑制人喉鱗癌Hep-2細胞裸鼠移植瘤的MVD,即對移植瘤的血管生成有明顯的抑制作