間斷性復(fù)灌干預(yù)對(duì)缺血腦的保護(hù)及其機(jī)制研究.pdf

1、腦血管疾病已成為中國(guó)第二位死亡原因,其中約80％為缺血性疾病。溶栓治療后腦組織將面臨再次損傷,即缺血／復(fù)灌損傷(ischemia／reperfusion injury,I／R損傷)。間斷性復(fù)灌干預(yù)(interrupted reperfusion intervention,IRIV)治療是在復(fù)灌初期對(duì)復(fù)灌血流實(shí)施一系列短暫的機(jī)械性梗阻和再灌注的方法,已被證明具有神經(jīng)保護(hù)作用,但對(duì)其保護(hù)機(jī)制的研究仍存在諸多空白。
　　 本論文用C5

2、7BL／6小鼠,通過(guò)手術(shù)前后局部腦血流多普勒檢測(cè),橫桿跑動(dòng)測(cè)試,建立雙側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎(bilateral common carotid arterial occlusion,BCCAO)20 min所導(dǎo)致的小鼠全腦缺血模型。
　　 在該模型上,我們對(duì)IRIV干預(yù)程序及其治療時(shí)間窗進(jìn)行了優(yōu)化,利用橫桿跑動(dòng)、爬桿和水迷宮實(shí)驗(yàn)各參數(shù)作為評(píng)價(jià)指標(biāo),對(duì)3個(gè)循環(huán)的10 s／10 s、15 s／15 s、30 s／30s三種不同的夾閉／復(fù)灌I

3、RIV程序的神經(jīng)功能保護(hù)作用進(jìn)行評(píng)測(cè),選取最優(yōu)IRIV干預(yù)程序組進(jìn)行治療時(shí)間窗的的確定。結(jié)果顯示,15 s／15 s IRIV程序具有較好的神經(jīng)功能保護(hù)作用,在缺血后的60 min內(nèi)效果較好。
　　 NADPH氧化酶(NADPH oxidase,NOX)是被復(fù)灌事件激活的體內(nèi)重要氧化酶,我們利用NOX抑制劑Apocynin結(jié)合IRIV或兩種干預(yù)單獨(dú)使用的方式,觀察小鼠I／R損傷后在橫桿跑動(dòng)、爬桿和水迷宮實(shí)驗(yàn)中的表現(xiàn),小鼠腦部皮層

4、、海馬和紋狀體神經(jīng)元的存活率,腦組織中NOX活性及其重要亞基gp91phox和p47phox的表達(dá),p47phox的轉(zhuǎn)位,以及Racl的活化水平,以探究IRIV是否通過(guò)抑制NOX發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)果顯示,IRIV通過(guò)減少p47phox轉(zhuǎn)位,降低NOX的裝配,并主要通過(guò)降低Racl的活化水平抑制已裝配N(xiāo)OX的激活。
　　 復(fù)灌后NMDA受體的激活可影響NOX的活性,我們應(yīng)用腦室給NMDA或MK-801結(jié)合IRIV的方式,觀察I／

5、R損傷后腦組織中神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度,Racl的表達(dá)和活化,NOX活性水平,以及NR2A和NR2B亞基的表達(dá),以探究IRIV是否通過(guò)NMDA受體的激活抑制NOX。結(jié)果顯示,IRIV可抑制缺血／復(fù)灌后NR2A和NR2B亞基表達(dá)和胞體內(nèi)游離Ca2+濃度的增高,從而影響Racl活化,抑制NOX活性升高。
　　 為進(jìn)一步探究NMDA和NOX之間的聯(lián)系,我們建立離體培養(yǎng)海馬神經(jīng)元氧糖剝奪／復(fù)灌(oxygen and glucose d

6、eprivation／reperfusion,OGD／RP)模型,應(yīng)用NMDA受體激動(dòng)劑NMDA和抑制劑MK-801、經(jīng)典型PKC(classic PKC,cPKC)激動(dòng)劑PMA和抑制劑G(o)6983等工具藥,觀察OGD／RP后神經(jīng)元內(nèi)游離Ca2+濃度,Racl、gp91phox和p47phox的表達(dá)水平,以及NOX活性水平.結(jié)果顯示,復(fù)灌損傷后NOX活性受NMDAR-Ca2+-cPKC-Racl通路調(diào)控。
　　 綜上,IRI