Aβ誘導(dǎo)tau蛋白過度磷酸化的實證及初步機制.pdf

1、研究背景:
　　阿爾茨海默病即老年癡呆癥。是一種進行性發(fā)展的神經(jīng)退行性疾病,臨床表現(xiàn)為認知和記憶功能的不斷惡化,日常生活能力進行性減退,并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。目前,針對AD的發(fā)病機制提出了各種學(xué)說,其中“Aβ學(xué)說”、“tau學(xué)說”是最為被接受的主流學(xué)說。Aβ學(xué)說指出,由于代謝異常,Aβ蛋白不能及時清除,在腦內(nèi)特定區(qū)域沉積,形成老年斑,最終導(dǎo)致神經(jīng)元死亡,抑制神經(jīng)元再生,AD的發(fā)生。Tau學(xué)說認為tau蛋白的過度磷酸化導(dǎo)致

2、其維持和促進神經(jīng)元細胞微管結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的作用喪失,導(dǎo)致細胞骨架發(fā)生改變,形成神經(jīng)元纖維纏結(jié),神經(jīng)元細胞死亡,從而出現(xiàn)一系列AD病理特征的出現(xiàn)。
　　最近研究發(fā)現(xiàn),可溶性寡聚態(tài)形式的Aβ(ADDLs)具有更強的神經(jīng)毒性。且有研究指出Aβ誘導(dǎo)了tau蛋白的過度磷酸化,其途徑是通過激活促進tau蛋白磷酸化的某些激酶。因此,又來越多的證據(jù)顯示“Aβ學(xué)說”和“tau學(xué)說”的聯(lián)合致病學(xué)說更為合理。
　　為了進一步證實Aβ誘導(dǎo)了tau蛋白的過

3、度磷酸化,共同導(dǎo)致的AD的發(fā)生,本課題擬從以下幾個方面入手,得出結(jié)論:
　　(1)Aβ是AD發(fā)病的源頭,其產(chǎn)生和清除不平衡導(dǎo)致了后續(xù)AD病理特征的出現(xiàn);
　　(2)可溶性寡聚態(tài)形式的Aβ因具有更強的神經(jīng)毒性,是AD的最主要病因。
　　(3)Aβ誘導(dǎo)了tau蛋白的過度磷酸化,使其從神經(jīng)微管上解離出來,游離tau蛋白增多,最終神經(jīng)元死亡,Aβ和tau蛋白共同導(dǎo)致了AD病情的發(fā)生發(fā)展。
　　(4)Aβ激活了促使tau蛋

4、白磷酸化的激酶cdk5。
　　研究方法:
　　1.利用Aβ-intrahippocampal injection的方法,向?qū)嶒炐∈竽X內(nèi)海馬CA1區(qū)注射可溶寡聚態(tài)形式的Aβ42,以模擬AD的主要致病因素,制備動物模型。實驗小鼠分(BALB/c)兩組,實驗組和對照組,實驗組注射可溶寡聚態(tài)形式的Aβ42(每只小鼠每側(cè)海馬注射4),對照組注射等體積無菌生理鹽水。術(shù)后7天取材。
　　2.常規(guī)HE染色,觀察Aβ42組和NS組之間的

5、差異
　　3.利用免疫組織化學(xué)的方法檢測實驗組Aβ42的沉積,觀察Aβ42沉積的位置。
　　4.利用免疫組化和western blot方法檢測cdk5在各組小鼠腦內(nèi)的表達情況。
　　5.利用免疫組化和western blot方法檢測p-tau蛋白在各組小鼠腦內(nèi)的表達情況。
　　6.利用RT-PCR檢測tau蛋白在各組小鼠腦內(nèi)表達量的變化。
　　研究結(jié)果:
　　1.注射NS和Aβ42的小鼠腦內(nèi)有明顯的炎

6、癥損傷,Aβ組的小鼠炎癥損傷更為明顯,引發(fā)神經(jīng)元變性。
　　2.Aβ免疫組化顯示,Aβ主要在海馬區(qū)沉積,隨著時間的推移,術(shù)后7-21天逐漸減少。
　　3.Cdk5免疫組化和western blot結(jié)果顯示,在小鼠腦內(nèi)海馬區(qū)注射部位和齒狀回的亞顆粒細胞層(SGZ)均有cdk5陽性細胞,Aβ組cdk5陽性結(jié)果明顯多于NS組,差異極顯著(P<0.01)。
　　4.P-tau的免疫組化和western blot結(jié)果顯示,在小鼠