6-姜酚在不同環(huán)境中對HepG-2細胞殺傷和化療增敏作用的研究.pdf

1、研究背景:肝細胞癌是最常見的惡性肝膽疾病，每年約有1，000，000人病死，其發(fā)病率在逐年增加，2015到2020年將到達一個平臺期，據(jù)估計每年約有600000新發(fā)病例，并且其致死率在所有的癌癥中占第三位。目前肝細胞癌的治療包括以下幾種，主要分為局限性治療和全身性治療兩大類，局限性治療包括外科手術、肝移植、經(jīng)皮射頻消融、肝動脈化療栓塞療法、選擇性內部放療法，全身性治療包括化療、免疫激素治療、射靶療法、分子靶向治療等，臨床中主要采取外科手

2、術和化療相結合的綜合治療模式，但是病人的預后不佳。阿霉素(多柔比星doxorubicinhydrochloride，DOX，adriamyein，ADM)，屬于蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，在癌癥的化療中起到了重要的作用，但由于其心臟毒性，限制了劑量的提高和化療效果。另外肝癌化療副作用明顯，腫瘤多藥耐藥比例高且費用昂貴使得相當一部分患者不能耐受被迫治療中斷而致療效不佳。因此，尋求高效、低毒、價廉的抗腫瘤方法是目前研究的熱點之一。6-姜酚(6-gin

3、gerol)是生姜的主要活性成分，研究證實其有強心、防治心血管疾病、抗凝血、抗氧化、抗腫瘤、抗炎、健胃與抗胃潰瘍作用、保肝利膽、防腐殺蟲、驅蟲等生物活性。近年來，一系列體外實驗表明，6-姜酚具有廣譜的抗腫瘤活性，但其有效性和安全性仍需臨床試驗檢驗。
　　研究目的:對比6-姜酚在正常模式和低氧低糖模式兩種下對于HepG-2細胞的殺傷和化療增敏作用。
　　研究對象及方法:人肝癌細胞株HepG-2，由山東大學生理實驗室惠贈。生長于

4、含10％的FBS、100U/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基，在37℃、含5％二氧化碳飽和濕度孵育箱培養(yǎng)。通過不同濃度ADM和姜酚分別刺激培養(yǎng)至對數(shù)期的HepG-2細胞，采用CCK-8試劑盒檢測在不同濃度藥物刺激下HepG-2細胞的增殖反應。通過流式細胞術結合PI及AnnexinV-FITC雙標染色法檢測ADM、姜酚及兩者聯(lián)合作用后細胞的凋亡情況。采用RT-PCR法檢測bcl-2、bax以及birc-5mRNA的表達情

5、況。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS18.0軟件軟件包完成。
　　研究結果:6-姜酚、ADM作用于HepG-2細胞后，細胞生長受到明顯抑制。兩種模式下6-姜酚組以及阿霉素組的抑制率隨濃度的升高而升高，抑制率具有濃度依賴性。流式細胞術檢測結果顯示兩種培養(yǎng)條件下實驗組各濃度組細胞凋亡百分比均比對照組增高，差異具有統(tǒng)計學意義，兩藥聯(lián)用組的凋亡數(shù)最高，且低氧低糖組各濃度組的凋亡數(shù)高于正常培養(yǎng)各濃度組。Real-timePCR檢測表明:正常培養(yǎng)條件下

6、與對照組相比實驗組bcl-2、birc-5表達降低，bax表達無明顯變化。低氧低糖條件下與對照組相比實驗組bcl-2、birc-5表達明顯降低,bax表達增高。在低氧低糖環(huán)境下bcl-2的表達較正常培養(yǎng)條件下的表達明顯增高，而bax、birc-5表達明顯減少，bcl-2/bax明顯高于正常培養(yǎng)組。
　　結論:6-姜酚可能通過下調birc-5的表達，降低Survivin蛋白抑制腫瘤細胞的凋亡的能力對HepG-2細胞產(chǎn)生殺傷和化療增敏