CD98在實(shí)驗(yàn)性IBD小鼠外周血和結(jié)腸上皮中的表達(dá).pdf

1、背景和目的：
　　炎癥性腸病(inflammatoryboweldisease，IBD)包括潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis，UC)和克羅恩病(Crohn'sdisease，CD)，其病因及發(fā)病機(jī)制目前仍不清楚。該病在西方國(guó)家較為常見(jiàn)，但近年來(lái)我國(guó)IBD的發(fā)病率亦逐年升高。目前認(rèn)為，環(huán)境、遺傳、感染及免疫因素共同參與IBD的發(fā)病，其中免疫因素在IBD發(fā)病中起著關(guān)鍵作用。β1整合素(β1integrin)是整合素的一

2、個(gè)亞群，主要介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞外基質(zhì)成分間的粘附。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)CD98可以通過(guò)多種機(jī)制調(diào)節(jié)β1整合素的表達(dá)和聚集，進(jìn)而影響細(xì)胞粘附、極化等，促進(jìn)炎癥的進(jìn)程，并使炎癥持續(xù)化，還有氨基酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能，促進(jìn)細(xì)胞融合和增殖等。目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)CD98與IBD的相關(guān)研究較少。
　　本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立IBD動(dòng)物模型，觀察小鼠疾病活動(dòng)情況及結(jié)腸組織學(xué)變化，檢測(cè)CD98在外周血和結(jié)腸組織中的表達(dá)水平，并對(duì)模型組進(jìn)行干預(yù)，研究CD98在IBD致病中的作用。

3、　　方法：
　　將SPF級(jí)的雄性BALb/c小鼠隨機(jī)分為4組，每組為12只。具體分組如下。正常對(duì)照組:小鼠不進(jìn)行任何的干預(yù)，自由飲食。生理鹽水組:灌腸前禁食24h，自由飲水，灌腸后自由飲食，于實(shí)驗(yàn)第1天、第8天及第15天分別用100μl的生理鹽水灌腸。50％乙醇組:將生理鹽水組的生理鹽水替換為50％乙醇溶液100μl灌腸，其他操作和生理鹽水組相同。TNBS+50％乙醇組:灌腸前禁食24h，自由飲水，灌腸后自由飲食，于第1天用2.0

4、mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸，第8天用2.5mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸，第15天用3.0mgTNBS/50％乙醇溶液100μl灌腸。分別對(duì)各組的小鼠進(jìn)行DAI評(píng)分，于實(shí)驗(yàn)的第21天將小鼠全部處死。用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血中CD98的表達(dá)，結(jié)腸組織切片后做HE染色并進(jìn)行HI評(píng)分，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)小鼠結(jié)腸組織內(nèi)CD98的表達(dá)。數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，所有的計(jì)量資料均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）

5、表示，樣本均數(shù)間的比較采用單因素方差分析;四格表資料的比較采用x2檢驗(yàn)。以α=0.05為顯著性檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)正常對(duì)照組和生理鹽水組的小鼠，其結(jié)腸粘膜沒(méi)有發(fā)現(xiàn)炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，粘膜上皮完整，腺體的排列規(guī)則。而50％乙醇組小鼠的結(jié)腸粘膜層可發(fā)現(xiàn)少量淋巴細(xì)胞分布，粘膜上皮也基本完整，粘膜腺體的排列基本規(guī)則。TNBS+50％乙醇組小鼠的粘膜層和肌層內(nèi)可見(jiàn)大量的炎癥細(xì)胞侵潤(rùn)，并且粘膜下層和固有肌層內(nèi)可以發(fā)現(xiàn)小血管

6、增生，粘膜上皮細(xì)胞破碎，粘膜上皮可以見(jiàn)到小片狀的壞死，并且結(jié)腸粘膜組織學(xué)損傷的程度越深，CD98在外周血和結(jié)腸粘膜組織中的表達(dá)就越高。
　　2.流式細(xì)胞術(shù):應(yīng)用流式細(xì)胞儀及Cellquest3.0軟件獲取和分析雙色熒光參數(shù)，進(jìn)而得到全部數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)得到正常對(duì)照組、生理鹽水組、50％乙醇組和TNBS+50％乙醇組的外周血的CD98表達(dá)陽(yáng)性率分別為(71.10±0.81)％、(72.27±1.81)％、(73.72±2.26)％和(81

7、.32±2.87)％，各對(duì)照組CD98陽(yáng)性率與TNBS+50％乙醇組比較具有顯著差異(F=29.460，P＜0.05)。TNBS+50％乙醇組的外周血的CD98的陽(yáng)性率高于其他各組。
　　3.免疫組織化學(xué):CD98定位于細(xì)胞表面，用顯微鏡觀察，記錄每個(gè)視野結(jié)腸上皮細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例以及著色的強(qiáng)度并以此來(lái)綜合判斷。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)比例計(jì)分法為:≤25％、26％～50％、51％～75％、＞75％分別計(jì)為0分、1分、2分、3分;著色強(qiáng)度

8、計(jì)分法為:輕度著色、中度著色、重度著色分別計(jì)為1分、2分、3分。二者計(jì)分相加，規(guī)定≥3分代表CD98表達(dá)增強(qiáng)（顯示陽(yáng)性），規(guī)定＜3分代表CD98表達(dá)較低或缺失（顯示陰性）。實(shí)驗(yàn)得到正常對(duì)照組、生理鹽水組、50％乙醇組和TNBS+50％乙醇組結(jié)腸上皮中CD98表達(dá)的陽(yáng)性率分別為25.0％(3/12)、25.0％(3/12)、33.3％(4/12)、75.0％(9/12)，各組的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.567，P＜0.05)。TNBS