嗜酸乳桿菌對(duì)實(shí)驗(yàn)性結(jié)腸炎小鼠腸黏膜趨化因子RANTES和MCP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察嗜酸乳桿菌對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠急性結(jié)腸炎腸黏膜趨化因子RANTES和MCP-1表達(dá)的影響，從而探討嗜酸乳桿菌治療UC的效果及其可能的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 7-8周齡雄性BALB/c小鼠70只，清潔級(jí)，體重21.0±2.0克，隨機(jī)分為七組，分別為模型對(duì)照(DSS+空針插胃)組、陰性對(duì)照(DSS+生理鹽水)組、陽(yáng)性對(duì)照(DSS+美莎拉嗪)組、嗜酸乳桿菌低(DSS+106CFU/ml)、中(D

2、SS+107CFU/ml)、高(DSS+108CFU/ml)劑量組、正常對(duì)照組，每組10只。正常對(duì)照組自由飲用雙重蒸餾水，其余六組小鼠自由飲用2.5％DSS(分子量36000-50000)7天建立急性UC動(dòng)物模型。從造模前2天開(kāi)始，陰性組、陽(yáng)性組、嗜酸乳桿菌低、中、高劑量組分別給予無(wú)菌生理鹽水、美莎拉嗪(30.25mg/ml)、嗜酸乳桿菌菌液1.0×106CFU/ml、1.0×107CFU/m1、1.0×108CFU/ml灌胃，每次0.

3、2ml，一天2次。模型組給予空針插胃。造模期間，每天觀察小鼠進(jìn)食、活動(dòng)等一般情況及體重、大便性狀和隱血情況，評(píng)估結(jié)腸炎嚴(yán)重程度。造模第八天上午折頸法處死小鼠，取出結(jié)腸，測(cè)量回盲部至肛門(mén)的長(zhǎng)度。后用預(yù)冷生理鹽水沖洗凈結(jié)腸，分別在結(jié)腸末端(距肛門(mén)1cm)、結(jié)腸中段、結(jié)腸上段(距盲腸1cm)處各剪取1cm長(zhǎng)的結(jié)腸，末端結(jié)腸以4％的甲醛溶液固定，常規(guī)石蠟包埋、切片(4μm)、HE染色，觀察組織學(xué)改變。其余結(jié)腸-70℃保存以備逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-

4、PCR)。觀察指標(biāo)包括：疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)、結(jié)腸長(zhǎng)度、組織學(xué)損傷評(píng)分；免疫組化SP法從蛋白水平檢測(cè)趨化因子RANTES和MCP-1的表達(dá)量；半定量RT-PCR方法從mRNA水平檢測(cè)趨化因子RANTES和MCP-1及核因子STAT1的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.嗜酸乳桿菌各干預(yù)組及美莎拉嗪組小鼠一般情況好，DAI積分相對(duì)降低，與模型組和陰性組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；嗜酸乳桿菌高劑量組結(jié)腸長(zhǎng)度大于模型

5、對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 2.各組UC小鼠組織學(xué)損傷評(píng)分均高于正常組(p＜0.05)，嗜酸乳桿菌各干預(yù)組小鼠組織學(xué)損傷評(píng)分均降低，與模型組、陰性組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。嗜酸乳桿菌高劑量組與美莎拉嗪組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 3.UC小鼠腸黏膜趨化因子RANTES和MCP-1的蛋白表達(dá)量較距常組高(p＜0.05)，

6、嗜酸乳桿菌和美莎拉嗪能降低趨化因子RANTES和MCP-1蛋白的表達(dá)量，嗜酸乳桿菌劑量越高效果越顯著(p＜0.05)。UC小鼠腸黏膜趨化因子RANTES和MCP-1的mRNA表達(dá)趨勢(shì)與蛋白表達(dá)趨勢(shì)相一致，嗜酸乳桿菌能降低其表達(dá)量，且嗜酸乳桿菌高劑量組優(yōu)于低劑量組(p＜0.05)。
　　 4.美莎拉嗪和嗜酸乳桿菌各干預(yù)組對(duì)STAT1表達(dá)均有抑制作用，并且美莎拉嗪的抑制作用要優(yōu)于嗜酸乳桿菌各劑量組(P＜0.05)。
　　 結(jié)