穿心蓮總內(nèi)酯固體脂質(zhì)納米粒的研究.pdf

1、目的：本文以穿心蓮總內(nèi)酯提取物（Total Lactones from Andrographis paniculata，TLA）為模型藥物，采用星點設計-效應面法優(yōu)化穿心蓮總內(nèi)酯固體脂質(zhì)納米粒（TLA-SLN）的制備工藝，并對其進行體內(nèi)外評價，包括包封率、載藥量、粒徑、Zeta電位、穩(wěn)定性、體外釋放規(guī)律、Caco-2單層細胞中的轉運機制、藥代動力學及降血脂藥效學等評價項目，以探索TLA作為SLN進行口服給藥載體的可行性。
　　方法

2、：以TLA中主要內(nèi)酯類成分穿心蓮內(nèi)酯（Andrographolide，AND）、新穿心蓮內(nèi)酯（Neoandrographolide，NEO）、14-去氧穿心蓮內(nèi)酯（14-Deoxy-andrographolide，DEO）和脫水穿心蓮內(nèi)酯（Dehydroandrographolide，DEH）為主要考察對象、分別建立包封率和載藥量的HPLC測定方法，并采用星點設計-效應面法對TLA-SLN的處方工藝進行優(yōu)化；以TLA-SLN的形態(tài)、粒徑

3、、Zeta電位和pH值等為考察指標，結合差示掃描量熱分析法對TLA-SLN及其凍干粉進行質(zhì)量評價，并運用透析袋法對TLA溶液、TLA混懸液、TLA-SLN混懸液及其凍干粉進行體外釋放度研究；采用LC-MS建立大鼠血清中穿心蓮總內(nèi)酯的定量分析方法，對TLA及TLA-SLN在大鼠體內(nèi)的藥代動力學和口服生物利用度進行研究；采用UPLC-MS建立細胞培養(yǎng)液中穿心蓮總內(nèi)酯的定量分析方法，對TLA及TLA-SLN在Caco-2細胞模型中的轉運機制進

4、行研究；以75％蛋黃乳劑建立小鼠急性高脂血癥模型，研究TLA及TLA-SLN在降脂方面的活性。
　　結果：通過星點設計-效應面法得到TLA-SLN的最優(yōu)處方：藥物與脂質(zhì)材料比為10%、磷脂脂質(zhì)比為1.25、Tween-80在水中的濃度百分比為4%。通過體外評價表明，TLA-SLN的平均粒徑為322.67±2.50 nm；分散度（PDI）為0.25±0.03；Zeta電位為-27.98±1.19 mV；pH為5.10±0.01；透視

5、電鏡掃描發(fā)現(xiàn)其形狀為橢圓形或不規(guī)則的形狀；差示掃描量熱分析發(fā)現(xiàn)TLA-SLN在47.5℃處形成明顯的特征吸熱峰。穩(wěn)定性研究發(fā)現(xiàn)，TLA-SLN混懸液不穩(wěn)定，而其凍干粉穩(wěn)定性得到較明顯改善。大鼠腸道灌流液中的穩(wěn)定性結果表明，TLA在十二指腸灌流液中極易發(fā)生轉化，而制成固體脂質(zhì)納米粒后，其穩(wěn)定性得到提高。體外釋放研究表明，TLA水溶液在8 h內(nèi)釋放97.86±9.78%，而TLA-SLN與凍干粉在24 h后才釋放完全，釋放屬于一級釋放速率方

6、程，表明藥物具有緩釋作用。而TLA混懸液則在24 h時釋放65.83±9.46%，釋放模型為Hixon-crowell方程。藥動學研究結果表明，大鼠口服TLA-SLN混懸液后，指標成分AND的血藥濃度Cmax為23.06±12.27 ng·mL-1，顯著高于口服TLA混懸液后AND的Cmax4.00±1.94 ng·mL-1（P<0.01），相對生物利用度為402.62%。新穿心蓮內(nèi)酯（NEO）的血藥濃度Cmax為34.43±21.34

7、 ng·mL-1，顯著高于口服TLA混懸液后NEO的Cmax5.75±3.45 ng·mL-1（P<0.05），而且生物利用度提高4倍。脫水穿心蓮內(nèi)酯（DEH）的血藥濃度Cmax為139.25±62.98 ng·mL-1，顯著高于口服TLA混懸液后DEH的Cmax25.18±16.12 ng·mL-1（P<0.01），生物利用度提高16倍。考察TLA及TLA-SLN吸收與轉運機制，得到TLA-SLN中AND在Caco-2細胞轉運模型中的

8、表觀滲透系數(shù)Papp為（8.94±0.45）×10-6 cm·s-1，顯著高于混合標準品、穿心蓮總內(nèi)酯提取物中AND的Papp（5.77±0.05）×10-6、（6.63±0.78）×10-6 cm·s-1（P<0.01）。TLA-SLN中DEH在Caco-2細胞轉運模型中的Papp為（10.71±0.58）×10-5 cm·s-1，顯著高于混合標準品，TLA中DEH的Papp（6.18±0.20）×10-5、（6.39±0.20）×1

9、0-5 cm·s-1（P<0.01）。降血脂藥效學實驗結果表明，通過口服TLA-SLN能顯著降低小鼠血清中膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白（LDL）和甘油三酯（TG）水平（P<0.05），提高小鼠血清中高密度脂蛋白（HDL）水平（P<0.05）。而相同劑量的TLA組具有降脂作用的趨勢，作用不明顯。說明TLA-SLN能提高TLA的口服生物利用度和降脂活性。
　　結論：通過將TLA制備成TLA-SLN后能改善其溶解度、穩(wěn)定性差的缺陷。通