膀胱腫瘤患者外周血樹突狀細胞免疫功能與PD-L1通路關系的研究.pdf

1、在我國,膀胱腫瘤作為泌尿系統(tǒng)發(fā)病率最高的腫瘤,術后復發(fā)率高是其特點之一。研究表明,膀胱腫瘤復發(fā)機制可能與腫瘤細胞不易被外周T細胞識別,在微環(huán)境中過量分泌負性細胞因子,且患者自身免疫監(jiān)視能力下降,最終發(fā)生免疫逃逸有關。以目前手術為主,膀胱灌注化療為輔的治療方案,并不能完全防止膀胱腫瘤的復發(fā)和進展。
　　樹突狀細胞(dendriticcells,DCs)是目前已知的人體內(nèi)抗原遞呈能力最強的專職抗原遞呈細胞(antigenpresent

2、ingcell,APC),能有效活化初始T細胞,在啟動免疫應答中起關鍵性作用;圍繞如何修飾DCs抗原遞呈能力,優(yōu)化腫瘤患者DCs免疫功能的研究已成為腫瘤免疫治療的熱點之一。程序性死亡配體1(Programmeddeathligand1,PD-L1)是腫瘤細胞過表達的負性共刺激分子,能與程序性死亡分子(PD-1)結合成PD-L1/PD-1,負向調(diào)節(jié)T細胞受體介導的信號轉導和細胞因子的分泌,導致T細胞功能的癱瘓。近年來,研究PD-L1與膀胱

3、腫瘤復發(fā)的機制,以及構建與PD-L1相關的DCs疫苗一直是本研究小組的重點方向之一。
　　研究目的:
　　1.探討膀胱腫瘤患者外周血DCs表型和免疫功能的改變;
　　2.通過阻斷PD-L1通路,觀察膀胱腫瘤患者外周血DCs免疫功能的變化,探討PD-L1與膀胱腫瘤發(fā)生免疫逃逸的關系。
　　材料和方法:
　　1.外周血DCs表型和免疫功能檢測:取膀胱腫瘤患者和正常人外周血,進行密度梯度離心分離,應用重組人粒細胞

4、-巨噬細胞集落刺激因子(Recombinanthumangramulocyre-macrophage,rhGM-CSF)和重組人白介素4(RecombinanthumanInterleukin-4,rhIL-4)進行體外誘導培養(yǎng)DCs,并從形態(tài)學和表型兩方面對所培養(yǎng)細胞進行鑒定;采用流式細胞儀檢測兩組DCs表達PD-L1、CD1a、HLA和CD83的變化;應用混合淋巴細胞反應檢測其刺激T淋巴細胞增殖能力;酶聯(lián)免疫吸附測定法(enzyme

5、-linkedimmunosorbentassay,ELISA法)檢測其分泌IL-10和IL-12的變化。
　　2.阻斷PD-L1通路的體外干預試驗:DCs分組如下:A組:正常人外周血DCs;B組:膀胱腫瘤患者外周血DCs;C組:膀胱腫瘤患者DCs+PD-L1單抗(5ug/ml);D組:膀胱腫瘤患者DCs+脂多糖(1ug/ml)(Lipopolysaccharide,LPS)。分別進行體外培養(yǎng)后,同上述方法檢測各組DCs表達CD1

6、a、HLA、CD83,刺激淋巴細胞增殖以及分泌IL-10和IL-12的變化。
　　結果:
　　1.膀胱腫瘤患者外周血DCs表達PD-L1陽性率,分泌IL-10含量均顯著高于正常組[(95.06±4.06)％和(76.63±6.90)%,(214.00±13.75)pg/mL和(83.78±7.95)pg/ml](P<0.05),DCs表達CD83陽性率及刺激淋巴細胞增殖的增殖指數(shù)均分別低于正常組[(16.20±1.91)%和

7、(35.53±1.58)%,(1.50±0.45)和(2.14±0.70)](P<0.05)。
　　2.阻斷PD-L1通路后膀胱腫瘤患者外周血DCs表達CD83陽性率較正常組無明顯變化[(17.60±3.09)%和(16.21±1.91)%](P>0.05),然而DCs刺激淋巴細胞增殖的能力較正常組明顯增強(4.00±1.28和1.49±0.45),分泌IL-12能力增強[(108.30±21.89)pg/ml和(37.17±14

8、.89)pg/ml],而分泌IL-10的能力減弱(108.90±21.77)pg/ml和(214.99±54.99)pg/ml](P<0.05)。
　　結論:
　　1.膀胱腫瘤患者外周血DCs高表達負性共刺激分子PD-L1,過度分泌IL-10及低表達CD83可能與膀胱腫瘤發(fā)生免疫逃逸有關。
　　2.阻斷PD-L1通路,可促進IL-12、抑制IL-10的分泌,誘導TH1型免疫漂移的發(fā)生,增強未成熟DCs刺激淋巴細胞增殖的