Ⅰ型膠原酶一步消化法高效、快速分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細(xì)胞及微囊化培養(yǎng)的研究.pdf

1、目的:尋求高效、快速體外分離培養(yǎng)人頭皮毛乳頭細(xì)胞的方法;并探討微囊化人頭皮毛乳頭細(xì)胞體外培養(yǎng)及異體移植的可行性;同時(shí)對(duì)海藻酸鈉-多聚賴氨酸-海藻酸鈉(APA)微囊與海藻酸鈉-BaCl2(BA)微囊的物理、生物性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。
　　方法:頭皮在真皮-皮下組織交界處剪開(kāi)以獲得含有毛囊中下部的皮下脂肪。將含有毛囊中下部的皮下脂肪置于青霉素瓶中,用眼科剪剪成肉泥狀,加入膠原酶Ⅰ進(jìn)行消化。當(dāng)消化至真皮鞘較為松散但仍包裹毛乳頭時(shí),以吸管機(jī)械吹打

2、幫助毛乳頭游離。通過(guò)沉淀、離心的方法,將毛乳頭與其它成分分離。最后,在顯微鏡下用移液器收集毛乳頭后進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)毛乳頭貼壁率、細(xì)胞遷出時(shí)間、工作強(qiáng)度、污染機(jī)會(huì)與顯微解剖法、顯微解剖加酶消化法進(jìn)行比較。細(xì)胞培養(yǎng)成功后,取4-6代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。在高壓電場(chǎng)微囊發(fā)生器作用下,將人頭皮毛乳頭細(xì)胞分別用APA微囊與BA微囊包裹。將微囊化的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)和異體移植,觀察微囊化細(xì)胞在體外及異體內(nèi)的存活情況,并對(duì)兩種微囊的生物相容性、機(jī)械強(qiáng)度、免疫隔離效

3、果及微囊內(nèi)細(xì)胞活性進(jìn)行比較。
　　結(jié)果:“Ⅰ型膠原酶一步消化法”分離一個(gè)毛乳頭平均的顯微鏡下工作時(shí)間為15秒,污染率為0％,與顯微解剖法及顯微解剖加酶消化法比較,顯著降低了工作強(qiáng)度和污染機(jī)會(huì)。其所需要的顯微技術(shù)僅僅是在顯微鏡下用移液器將毛乳頭吸出,大大降低了操作難度。同時(shí),該法保留了顯微解剖加酶消化法促進(jìn)毛乳頭貼壁和細(xì)胞遷出的優(yōu)點(diǎn)。在微囊的相互比較方面,APA微囊生物相容性優(yōu)于BA微囊(P<0.01),但機(jī)械強(qiáng)度低于BA微囊(P<