山茱萸新苷和人參皂苷肝保護(hù)及抗肝纖維化作用的研究.pdf

1、肝臟受到外界因素刺激，造成急性肝損傷。肝臟損傷后可以通過臨床藥物治療進(jìn)行一定的修復(fù)、促再生作用，減輕或控制病情進(jìn)展。造成的肝損傷可由肝纖維化進(jìn)展為肝硬化，可以說肝纖維化是向肝硬化發(fā)展的必經(jīng)階段，所以及時治療肝損傷，臨床早期診斷肝纖維化，并及時加以控制，可以有效阻斷疾病的進(jìn)一步發(fā)展和轉(zhuǎn)歸，具有重要的臨床治療意義。隨著分子生物學(xué)與藥物研究的發(fā)展，急性肝損傷以及抗肝纖維化的研究有許多突破性的進(jìn)展。目前臨床多用 N-乙酰半胱氨酸、拉米夫啶或恩替

2、卡韋治療，臨床療效甚微，尚無有效的治療方法。阻止肝纖維化的進(jìn)展或促進(jìn)纖維化的逆轉(zhuǎn)是治療肝纖維化的關(guān)鍵。為此，積極尋找有效的治療藥物及藥物作用靶點已成為研究者們的重要課題。本研究對山茱萸新苷和人參皂苷的肝保護(hù)作用和抗肝纖維化作用進(jìn)行深入探討，旨在探討是否有效阻斷肝細(xì)胞凋亡，抑制炎癥發(fā)展進(jìn)程，是否能緩解肝損傷以及肝纖維化。本研究采用四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)肝損傷作為動物研究模型，并用腫瘤壞死因子（TNF-α）刺激肝星狀細(xì)胞（HSC），探討山

3、茱萸新苷肝保護(hù)和人參皂苷 czh-A-69抗肝纖維化作用機制。
　　（1）四氯化碳（CCl4）誘導(dǎo)肝損傷作為動物研究模型，探討山茱萸新苷肝保護(hù)作用。大鼠腹腔注射CCl4誘導(dǎo)肝損傷16 h后血清轉(zhuǎn)氨酶、TNF-α和脂質(zhì)過氧化物顯著升高，而肝臟抗氧化酶降低。給予山茱萸新苷后各項指標(biāo)得以改善。組織學(xué)研究表明山茱萸新苷抑制CCl4誘導(dǎo)肝損傷。此外CCl4誘導(dǎo)肝損傷后誘發(fā)肝臟一氧化氮（NO）、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶（iNOS）以及環(huán)氧化酶-2

4、（COX-2）升高，細(xì)胞色素P4502E1(CYP2E1)表達(dá)降低。給予山茱萸新苷后可以顯著抑制肝臟NO形成、降少iNOS和COX-2蛋白表達(dá)，修復(fù)CYP2E1水平。研究結(jié)果表明山茱萸新苷通過調(diào)節(jié)CYP2E1水平、抑制炎癥應(yīng)答以及減少氧化應(yīng)激作用保護(hù)CCl4誘導(dǎo)的肝損傷。
　?。?）研究人參皂苷czh-A-69對活化肝星狀細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡作用。肝纖維化以Ⅰ型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（ECM）在肝臟的過度沉積作為表征。ECM包括Ⅰ型膠

5、原主要來源于活化的肝星狀細(xì)胞（HSC）。在纖維化進(jìn)程中，HSC由大量儲存維生素A的靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)化為僅含少量維生素A的纖維形成細(xì)胞，同時大量表達(dá)α-肌動蛋白(α-SMA)和 ECM。蛋白印跡結(jié)果表明人參皂苷 czh-A-69通過介導(dǎo)MAPK/Akt/TLR4/TAK-1、bcl-2/bax比值和線粒體細(xì)胞色素C水平誘導(dǎo)活化HSC凋亡，從而逆轉(zhuǎn)肝纖維化。人參皂苷代謝物czh-A-69（3.125μM）作用于活化HSC細(xì)胞24 h后或6.25μ

6、M作用1 h可以顯著調(diào)節(jié)caspase-3和PARP表達(dá)；顯著抑制TIMP-1、TLR4及TAK-1磷酸化；調(diào)節(jié)bcl-2/bax比值和線粒體細(xì)胞色素C水平；增加JNK/ERK/p38/MAPK磷酸化；顯著抑制Akt磷酸化。因此，人參皂苷 czh-A-69通過介導(dǎo) MAPK/Akt/TLR4/TAK-1信號系統(tǒng)調(diào)節(jié)肝纖維化，數(shù)據(jù)表明人參皂苷 czh-A-69對肝纖維化的干預(yù)機制為將人參皂苷 czh-A-69開發(fā)用于臨床肝纖維化治療提供了