2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  1.觀察高糖對(duì)成纖維細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡和炎癥的影響;
  2.驗(yàn)證bFGF對(duì)高糖抑制的成纖維細(xì)胞增殖及高糖誘導(dǎo)的凋亡炎癥保護(hù)作用;
  3.驗(yàn)證高糖損抑制成纖維細(xì)胞遷移是否通過抑制bFGF調(diào)控的JNK信號(hào);
  4.鑒定bFGF保護(hù)高糖損傷的細(xì)胞是否通過抵制特殊蛋白的硝基化修飾;
  方法:
  1.設(shè)置不同濃度血清的不同濃度高糖培養(yǎng)基,添加不同濃度bFGF作用不同時(shí)間,用CCK-8檢測(cè)細(xì)

2、胞增殖情況,用wester-blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)凋亡炎癥蛋白表達(dá)情況;
  2.使用FGFR1抑制劑PD173074抑制bFGF信號(hào),用細(xì)胞刮痕遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)bFGF和高糖對(duì)細(xì)胞遷移的影響,用wester-blot檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)凋亡炎癥蛋白表達(dá)及bFGF調(diào)節(jié)的關(guān)鍵蛋白.JNK和AKT的表達(dá);
  3.用激活的Rac1檢測(cè)試劑盒檢測(cè)高糖及bFGF對(duì)細(xì)胞內(nèi)激活的Rac1的表達(dá);
  4.用MDA檢測(cè)試劑盒、ROS檢測(cè)試劑盒和wes

3、ter-blot實(shí)驗(yàn),分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)氧化物、氧自由基、硝基化酪氨酸的表達(dá)水平;
  5.液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜(LC/MC)鑒定分析酪氨酸硝基化水平表達(dá)差異大的特殊蛋白;
  6.超氧化物歧化酶模擬劑MnTMPyP清除細(xì)胞內(nèi)的氧自由基,wester-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)AnnexinA2的硝基化水平;
  7.使用JNK和FGFR1抑制劑SP600125和PD173074分別抑制JNK和FGFR1活性,用細(xì)胞刮痕遷移實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

4、JNK對(duì)細(xì)胞遷移的影響;
  8.高糖對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響,用倒置顯微鏡直接鏡下觀察,并拍照記錄,用wester-blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)高糖對(duì)纖維化相關(guān)因子表達(dá)影響。
  結(jié)果:
  1.在高糖對(duì)成纖維細(xì)胞增殖影響實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)用高血清10%的高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)3天,不影響細(xì)胞增殖,而用極限條件的低血清(0.35%)培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞在15 mM的糖濃度細(xì)胞即發(fā)生明顯的增殖抑制。bFGF可以促進(jìn)高糖損傷的成纖維細(xì)胞恢復(fù)增殖;
  2

5、.在檢測(cè)高糖對(duì)細(xì)胞內(nèi)凋亡炎癥的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),高糖誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)凋亡炎癥蛋白(P53、C-Caspase3、TNF-α和PAI-1)的表達(dá),bFGF可以抵制這種現(xiàn)象;
  3.活性Rac1蛋白的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),bFGF可以激活人成纖維細(xì)胞中Rac1表達(dá),但與低糖組別相比,高糖或添加FGFR1抑制劑的組別的表達(dá)沒影響;
  4.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高糖引起脂質(zhì)氧化物、ROS和RNS的水平異常增高并抑制JNK的磷酸化,bFGF可以激活JNK磷酸

6、化并促進(jìn)成纖維細(xì)胞遷移,用JNK抑制劑后顯著抑制細(xì)胞遷移;
  5.在液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜(LC/MC)鑒定表達(dá)差異大硝基化酪氨酸條帶的實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)鑒定出的其中之一的Annexin A2蛋白與細(xì)胞遷移有關(guān);
  6.添加FGFR-1或JNK抑制劑會(huì)增加Annexin A2蛋白硝基化水平,而bFGF可以翻轉(zhuǎn)高糖介導(dǎo)的增高的Annexin A2硝基化。抑制FGFR-1信號(hào)還會(huì)抵制bFGF激活的JNK;
  7.在觀察高糖對(duì)細(xì)胞

7、形態(tài)和纖維化相關(guān)因子表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)中,發(fā)現(xiàn)高糖損傷3天,引起纖維化相關(guān)因子表達(dá)紊亂,但對(duì)細(xì)胞形態(tài)影響不大。
  結(jié)論:
  本實(shí)驗(yàn)我們使用高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)提取的原代人包皮成纖維細(xì)胞,體外模擬糖尿病高糖環(huán)境,研究糖尿病對(duì)創(chuàng)面愈合影響的分子機(jī)制。
  實(shí)驗(yàn)顯示常規(guī)30 mM高糖環(huán)境培養(yǎng)成纖維細(xì)胞抑制細(xì)胞遷移,但不影響細(xì)胞增殖。bFGF的強(qiáng)烈促遷移作用,援救了高糖對(duì)成纖維細(xì)胞的遷移損傷作用。
  分子和細(xì)胞生物學(xué)研究顯示

8、,高糖增加細(xì)胞內(nèi)ROS水平,抑制JNK磷酸化,并且對(duì)Rac1活性表達(dá)沒影響。bFGF調(diào)控細(xì)胞遷移時(shí),需要激活JNK和Rac1。
  蛋白質(zhì)組學(xué)研究鑒定高糖增加的成纖維細(xì)胞內(nèi)特殊蛋白Annexin A2的硝基化修飾水平,并且bFGF信號(hào)的激活可以抵制高糖引起的硝基化加重。添加FGFR和JNK抑制劑,延遲成纖維細(xì)胞遷移,增加Annexin A2硝基化,表明Annexin A2受bFGF信號(hào)調(diào)節(jié),通過激活JNK。
  總的來說,高

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