Hedgehog通路參與bFGF促成纖維細胞遷移的分子機制研究.pdf

1、目的：探討Hedgehog通路在bFGF促成纖維細胞遷移過程中的重要作用及潛在的分子機制。
　　方法：采用細胞劃痕實驗，3D球狀體侵襲實驗，大鼠皮膚創(chuàng)傷模型來檢測成纖維細胞遷移，侵襲和皮膚創(chuàng)傷愈合的速度。通過Western blot實驗檢測受bFGF和Hh通路調(diào)控的相關蛋白的表達水平。運用siRNA實驗抑制內(nèi)源性的Smo， Gli1和β-catenin轉錄表達，同時進一步采用RNA深度測序、轉錄組學和qRT-PCR分析技術檢測在β

2、-catenin干擾后，總轉錄組的變化情況及對Hh通路相關基因表達的影響。
　　結果：提取bFGF處理后的成纖維細胞中的RNA進行RNA測序。測序實驗結果顯示，在bFGF處理后，Hh通路關鍵基因（包括SMO，Patch1，Gli1，Gli2， Gli3）的表達水平都發(fā)生了改變。并且發(fā)現(xiàn)用 SAG（Smo的激動劑，激活 Hh通路）能促進成纖維細胞的遷移，侵襲和皮膚的創(chuàng)傷愈合，而Cyc（Cyclopamine， Smo的抑制劑，抑制

3、Hh通路）使成纖維細胞的遷移，侵襲和皮膚創(chuàng)傷愈合的速度都明顯減緩。GANT61（Gli1/Gli2的選擇性抑制劑）也能明顯抑制細胞的遷移，侵襲和皮膚的創(chuàng)傷愈合的速度。Western blot和siRNA轉染實驗結果顯示， SAG能上調(diào)AKT和JNK的磷酸化水平及β-catenin在細胞核內(nèi)的積累量，證明Smo位于PI3K-JNK-β-catenin的上游，進而促進成纖維細胞的遷移。此外，RNA測序和qRT-PCR分析結果顯示，β-cat