高糖促進(jìn)p.glps刺激人牙齦成纖維細(xì)胞分泌炎癥因子機(jī)制的初步研究

1、分類號：R 7 8 1 ．4密 級：學(xué)位類別： 科學(xué)學(xué)位團(tuán) 專業(yè)學(xué)位口學(xué)校代碼：1 0062學(xué) 號：2 0 1 0 6 0 2 5 8 8學(xué)科門類： 醫(yī)學(xué)又坪鼉斜矢號碩士學(xué)位論文M 【A S T E R ’S D I S S E R T A T I O N論文題目：高糖促進(jìn)P ．g L P S 刺激人牙齦成纖維細(xì)胞分泌炎癥因子機(jī)制的初步研究T IT L E T h e S t u d yo n M e c h a n i s m o f

2、 H i g h G l u c o s eE n h a n c i n g P ．gL P S i nS t i m u l a t i n g H u m a nG i n g i v a l F i b r o b l a s t s t oS e c r e t t h eI n f l a m m a t o r yC y t o k i n e s一級學(xué)科：口腔醫(yī)學(xué)二級學(xué)科：口腔臨床醫(yī)論文作者：魏叢叢指導(dǎo)教師：鄧嘉胤主任醫(yī)

3、師導(dǎo)師組成員：蔣少云吳陳炫天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一三年五月天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：通過體外培養(yǎng)獲得人牙齦成纖維細(xì)胞( H u m a n g i n g i v a lf i b r o b l a s t s ，H G F s ) ，采用高濃度葡萄糖、牙齦卟啉單胞菌( P o r p h y r o m o n a sg i n g i v a l i s ，P g ) 脂多糖( L i p o p o l y s a

4、 c c h a r i d e ，L P S ) 對細(xì)胞進(jìn)行刺激，酶聯(lián)免疫法( E n z y m e —l i n k e di m m u n o s o r b e n ta s s a y ，E L I S A ) 檢測H G F s 分泌腫瘤壞死因子．0 【( T u m o r n e c r o s i sf a c t o r ．a(chǎn) ，T N F ．0 【) 和白細(xì)胞介素．1 p ( I n t e r l e u k

5、 i n ．1 p ，I L ．1 D ) 的水平，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量P C R 檢測T o l l 樣受體2 ( T o l l ．1 i k e r e c e p t o r 2 ，T L R 2 ) 和T o l l 樣受體4 ( T o l l ．1 i k er e c e p t o r 4 ，T L R 4 ) 在H G F s 中的表達(dá)，并用a n t i ．T L R 2 和a n t i ．T L R 4 單克隆抗體阻斷

6、后觀察I L ．1 p 和T N F ．a(chǎn) 水平的變化，以期初步探討高糖對P ．g L P S 刺激H G F s分泌炎癥細(xì)胞因子的作用及其機(jī)制，為闡明糖尿病性牙周炎的發(fā)病機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法：1 ．在天津醫(yī)科大學(xué)口腔醫(yī)院頜面外科選擇第三磨牙阻生齒完全埋伏、身體健康的患者5 例( 年齡1 8 ．2 5 歲) ，獲得患者的知情同意后，在智齒拔除過程中收集牙齦。用無菌中性蛋白分散酶( D i s p a s eI I ) 消化分離牙齦上皮

7、后，組織塊法培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞，倒置相差顯微鏡下觀察其形態(tài)及生長狀況。2 ．采用E L I S A 檢測高糖、P ．g L P S ( 1 I ．t g ／m l 、1 0g t g ／m 1 ) 和高糖／P ．gL P S 刺激6 h 和1 2 h 后細(xì)胞上清液中T N F ．c 【和I L ．1 p 水平的變化，以低糖組、P ．g L P S ／低糖刺激組作對照。3 。以高糖、P ．gL P S ( 1l x g ／m l 、1 0

8、p ．g ／m 1 ) 和高糖／P ．gL P S 刺激H G F s 6h 和1 2 h 后，采用實(shí)時(shí)定量P C R 檢測T L R 2 和T L R 4 在H G F s 中的表達(dá)水平，設(shè)低糖組、P ．gL P S ／低；糖刺激組作對照。4 ．應(yīng)用a n t i ．T L R 2 和a n t i ．T L R 4 的單克隆抗體對H G F s 表面的T L R 2 、4 進(jìn)行阻斷，用高糖或P ．gL P S ／高糖刺激H G F