中國(guó)野生葡萄抗白腐病性狀調(diào)查與研究.pdf

1、葡萄是我國(guó)栽培最廣泛的水果之一，2010年我國(guó)葡萄總產(chǎn)量居世界第一位，與葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展伴隨的是葡萄病害的發(fā)生和危害。白腐病是由真菌引起的病害，是危害葡萄的四大病害之一，它對(duì)葡萄會(huì)有致命的影響，如何提高葡萄對(duì)白腐病的抗性是亟待解決的問題。中國(guó)野生葡萄具有豐富的抗性，在抗寒、抗旱、抗病以及在抗?jié)駸崮芰Ψ矫娑季哂休^強(qiáng)抗性。本研究以中國(guó)野生葡萄為研究對(duì)象，旨在挖掘葡萄抗白腐病的抗性資源，克隆其抗性基因。
　　首先，采用田間調(diào)查結(jié)合田間人工

2、接種鑒定的方法對(duì)葡萄資源圃內(nèi)的中國(guó)野生葡萄抗白腐病性狀進(jìn)行了系統(tǒng)的評(píng)價(jià)。田間調(diào)查發(fā)現(xiàn)，中國(guó)葡萄野生種的果實(shí)在自然發(fā)病條件下不感白腐病。在人工接種條件下，野生葡萄卻表現(xiàn)出種間與種內(nèi)的抗性差異，調(diào)查發(fā)現(xiàn)，塘尾葡萄與山葡萄表現(xiàn)出高抗白腐病性狀，而燕山葡萄與湖南刺葡萄則表現(xiàn)出高感白腐病性狀。調(diào)查還發(fā)現(xiàn)在同一種內(nèi)也存在著抗病和感病兩種類型。
　　其次，在調(diào)查的基礎(chǔ)上，選用抗白腐病的刺葡萄作為研究材料，采用同源克隆的方法，來(lái)獲取葡萄抗白腐病的

3、抗病基因同源序列（RGA），并通過熒光定量 PCR分析這些基因與白腐病之間的關(guān)系。根據(jù) NBS-LRR類抗病基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物，提取抗病材料的DNA與RNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增及篩選得到了10個(gè)RGAs，這10條 RGA編碼的氨基酸序列均含有 NBS的4個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，即 P-loop（GGVGKTT）、Kinase-2a（VLDDVW/D）、Kinase-3a（GSR/KILVTTR）和HD（GLPLAL）。這10條抗病基因同源序列，6條

4、分離自基因組DNA（NB-1、NB-3、NB-5、NB-7、NB-11和NB-12），4條分離自cDNA（NBS-6、NBS-4、NBS-13和NBS-16）。10條葡萄抗病基因同源序列所編碼的氨基酸，同4個(gè)已知 R基因氨基酸序列的同源性在20.8％-46.2%之間，NB7基因同擬南芥抗丁香假單孢桿菌基因RPS5之間的同源性為46.2%。而且，10條葡萄抗病基因同源序列在氨基酸水平上的同源性表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性，同源性分布在23.5%-9

5、8.8%之間。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)這10個(gè) RGAs中4個(gè)屬于 non-TIR-NBS-LRR類抗病基因，6個(gè)屬于 TIR-NBS-LRR類抗病基因。經(jīng)過 NCBI比對(duì)，RGAs和葡萄上已經(jīng)定位在葡萄染色體5號(hào)、9號(hào)、13號(hào)、18號(hào)和19號(hào)的假定抗病蛋白 mRNA高度同源。熒光定量PCR分析表明NB7基因受到葡萄白腐菌的誘導(dǎo)，說(shuō)明NB7基因可能為潛在的葡萄上的抗白腐病基因，為最終克隆葡萄抗白腐病基因奠定了基礎(chǔ)，其確切的功能還需進(jìn)行進(jìn)一步的研究