桑黃菌超聲輔助發(fā)酵及胞內(nèi)多糖提取的研究.pdf

1、桑黃菌（Phellinus igniarius）是一類(lèi)珍稀的大型藥用真菌，含多種活性成分，其中最主要的是多糖類(lèi)物質(zhì)。近年來(lái)的研究表明，桑黃多糖具有提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒、抗菌及其它多種生物活性功能。本文采用液體深層發(fā)酵方法對(duì)桑黃菌進(jìn)行培養(yǎng)，研究了桑黃菌液體深層發(fā)酵的基本性質(zhì)，探討了超聲波輔助作用對(duì)桑黃菌發(fā)酵及其胞內(nèi)多糖提取的影響和不同提取方法對(duì)桑黃菌多糖理化性質(zhì)、抗氧化活性的影響。主要研究工作及結(jié)論如下:
　　(1)在課題組之

2、前的優(yōu)化培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探究了深層發(fā)酵過(guò)程中桑黃菌性質(zhì)的變化。發(fā)酵過(guò)程中菌絲產(chǎn)量和粗多糖量均隨著時(shí)間的增加而先增后趨于平穩(wěn)，還原糖含量總體下降，可溶性蛋白在第8d時(shí)達(dá)到最高值后下降。發(fā)酵液中漆酶、羧甲基纖維素酶、錳過(guò)氧化物酶活性均在初始階段有所升高，達(dá)到最高值后下降。桑黃菌中抑制ACE的活性物質(zhì)是蛋白質(zhì)成分。發(fā)酵液中黃酮成分對(duì)大腸桿菌，金黃色葡萄球菌，李斯特菌以及青霉具有一定的抑制作用，然而多糖成分對(duì)細(xì)菌和霉菌均沒(méi)有抑菌效果。桑黃菌

3、發(fā)酵液的揮發(fā)性成分主要有六甲基環(huán)三硅氧烷、十甲基環(huán)五硅氧烷、異戊醇、糠醇、壬醛、乙酸、苯甲酸甲酯苯以及吡啶。
　　(2)探究了不同超聲頻率、超聲時(shí)間、超聲功率對(duì)桑黃菌發(fā)酵及胞內(nèi)多糖提取的影響。研究發(fā)現(xiàn)，在論文研究范圍內(nèi)，在桑黃菌對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（第4天）加載一定時(shí)間(0、0.5、1、1.5、2 h)的超聲，對(duì)桑黃菌的生長(zhǎng)無(wú)明顯作用;每天加載超聲不同時(shí)間(0、10、20、30、40 min)，超聲時(shí)間與菌絲產(chǎn)量呈負(fù)相關(guān)，與相同菌絲粉的粗多

4、糖提取量呈正相關(guān)。并且，三頻超聲(20+28+40kHz)同時(shí)每天作用1 min也會(huì)明顯降低桑黃菌總產(chǎn)量，提高相同菌絲粉的粗多糖提取量。不同超聲功率(0、20、60、80、100 W)條件下，隨著功率的增加，總菌絲量減少，相同菌絲粉的粗多糖提取量增加。單頻超聲（28、40 kHz）下，20 W與空白組的菌絲量有些微增加。超聲作用于桑黃菌發(fā)酵液會(huì)減少桑黃菌菌絲量，但同時(shí)也提高了粗多糖提取量。最終計(jì)算到每個(gè)搖瓶總共能得到的粗多糖量與空白組相

5、比并沒(méi)有顯著的影響。通過(guò)掃描電鏡觀察，未經(jīng)超聲處理的菌絲體表面相對(duì)平滑，隨著超聲時(shí)間的增加，功率的增大，菌絲表面不光滑程度就會(huì)越明顯，功率加大還會(huì)使菌絲體斷裂現(xiàn)象變得嚴(yán)重。通過(guò)透射電鏡觀察，超聲強(qiáng)度越大，作用時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞的破碎程度越大，存活力降低。當(dāng)三個(gè)頻率同時(shí)超聲作用40 min時(shí)，細(xì)胞壁完全破碎，細(xì)胞結(jié)構(gòu)不再保持完整。
　　(3)在單因素方法確定了水提法的最佳條件下，探究乙醇濃度(65％、75％、85％、95％)對(duì)所獲多糖結(jié)

6、構(gòu)及其性質(zhì)的影響。隨著乙醇濃度的增加，粗多糖的得率增加，而粗多糖中多糖含量呈現(xiàn)不規(guī)則的變化;不同乙醇濃度沉淀的桑黃菌多糖樣品中均含有木糖，甘露糖，半乳糖和葡萄糖，且均含有一種未知成分，但是不同樣品多糖的單糖比例存在差異。紅外掃描顯示不同乙醇濃度沉淀獲得的多糖均在結(jié)構(gòu)上類(lèi)似，都含有β-D-吡喃葡萄糖環(huán);實(shí)驗(yàn)范圍內(nèi)，桑黃菌胞內(nèi)多糖體外抗氧化能力有明顯的量效關(guān)系，95％乙醇濃度沉淀的多糖對(duì)DPPH，·OH，F(xiàn)e3+，ABTS+抗氧化活性最高;

7、掃描電鏡圖像顯示，隨著乙醇濃度的升高，多糖粒徑增大，緊密度減小，松散度增加。
　　(4)熱水法提取的粗多糖得率較低，其多糖純度也不高，但多糖的實(shí)際得率最高;復(fù)合酶法提取的粗多糖得率高，但是純度最低;超聲法提取多糖的得率最低，然而多糖純度最高，且在時(shí)間、用水、能耗三個(gè)方面都具有顯著優(yōu)勢(shì)。復(fù)合酶法提取的多糖含有鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、甘露糖、半乳糖以及葡萄糖。水法提取的多糖樣品含有木糖、甘露糖、半乳糖和葡萄糖，且葡萄糖含量相對(duì)其他兩種