Fibrillin轉(zhuǎn)基因油菜的再生及其光合特性的檢測(cè).pdf

1、Fibrillin是一類由核基因編碼，與質(zhì)體相關(guān)的脂連接蛋白，廣泛存在于單子葉和雙子葉植物中。在逆境條件下，如強(qiáng)光、寒冷和干旱環(huán)境，該類蛋白大量積累，說(shuō)明Fibrillin在生物脅迫下發(fā)揮重要功能。在擬南芥中已發(fā)現(xiàn)Fibrillin是．ABl2(ABA insensitive)相互作用蛋白質(zhì)，其合成也依賴于ABI1，而ABI1和ABI2是脫落酸(ABA)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中的關(guān)鍵因子，推測(cè)Fibrillin作為負(fù)調(diào)控因子，參與到ABA信號(hào)傳導(dǎo)

2、途徑。同時(shí)Fibrillin與油質(zhì)體相關(guān)，強(qiáng)光下對(duì)光合系統(tǒng)Ⅱ有保護(hù)作用，推測(cè)該基因在油菜中的過(guò)量表達(dá)可能百利于提高油菜的抗逆能力和產(chǎn)油量。因此研究Fibrillin在油菜中的表達(dá)具有重要的理論意義和實(shí)踐意義。 本實(shí)驗(yàn)把Fibrillin操縱子(帶有葡萄糖苷酶GUS報(bào)告基因)和Fibrillin cDNA分別連接到pBll21質(zhì)粒上，采用根癌農(nóng)桿菌共培養(yǎng)的方法，以帶有1—2mm子葉柄的完整子葉為轉(zhuǎn)化受體，將連有35S啟動(dòng)子和NPT

3、 Ⅱ標(biāo)記基因的Fibrillin cDNA導(dǎo)入甘藍(lán)型油菜主要栽培品種“2005南系中”，獲得抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因植株，沒(méi)有得到含F(xiàn)ibrillin操縱子的轉(zhuǎn)基因植株。在實(shí)驗(yàn)中，根據(jù)材料的特點(diǎn)，優(yōu)化了預(yù)培養(yǎng)、農(nóng)桿菌浸染、共培養(yǎng)、誘導(dǎo)愈傷、誘導(dǎo)芽、生根等組織培養(yǎng)的各個(gè)步驟。對(duì)部分經(jīng)卡那霉素篩選得到的再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，目前有來(lái)自3個(gè)株系的植株表現(xiàn)為陽(yáng)性，初步證實(shí)外源基因已整合到植物細(xì)胞基因組中。將轉(zhuǎn)基因植株煉苗后移入大田，在3月初到4月末

4、油菜開(kāi)花結(jié)果期間，對(duì)葉片和角果分別進(jìn)行光合指標(biāo)和熒光指標(biāo)的檢測(cè)以及產(chǎn)量性狀的分析，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株和非轉(zhuǎn)基因植株之間存在明顯差異。針對(duì)Fibrillin啟動(dòng)子，我們將繼續(xù)優(yōu)化條件，以期得到轉(zhuǎn)基因成株苗，然后通過(guò)組織化學(xué)方法(如GuS染色)，檢測(cè)Fibrillin定位在植株的哪些器官組織進(jìn)行特異性表達(dá)。由于Fibrillin與油質(zhì)體相關(guān)，籃增強(qiáng)植物對(duì)外界環(huán)境的適應(yīng)能力，保護(hù)光合系統(tǒng)Ⅱ，因此，該基因在油菜中的表達(dá)可能有利于提高油菜光合效率、抗