新型GnRH疫苗的去勢(shì)效果評(píng)估.pdf

1、目的:研制新型GnRH疫苗，并探討其對(duì)雄性SD大鼠的去勢(shì)效果。
　　方法:(1)在固相多肽合成儀上合成GnRH并列體(GnRH-tandem，GnRH2)，高效液相色譜法(high performance liquid chromatography，HPLC)分析其純度，質(zhì)譜檢測(cè)其分子量。然后對(duì)GnRH2進(jìn)行MAP（multiple antigen peptide，MAP）修飾(GnRH2-MAP)并檢測(cè)其純度。(2)將18～20

2、d的雄性大鼠隨機(jī)分為GnRH2-MAP免疫組，GnRH2免疫組和對(duì)照組，每組30只，免疫組注射100μg/只疫苗，對(duì)照組注射50％佐劑生理鹽水溶液，每隔2W加強(qiáng)免疫一次，共免疫3次。(3)自免疫開(kāi)始，每2W采集一次樣品，每次5只，收集血液并分離出血清，記錄體重、睪丸重量及體積大小，取少量睪丸組織置于4％多聚甲醛溶液內(nèi)固定。(3)采用酶聯(lián)免疫分析法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)檢測(cè)血清中

3、GnRH抗體及睪酮水平。將睪丸組織進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋、蘇木素-伊紅（Haematoxylin-Eosin，HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照。
　　結(jié)果:(1)GnRH2-MAP純度高，達(dá)到95％以上。(2)免疫后，免疫組體重與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異(P＞0.05);免疫組大鼠血清GnRH抗體較對(duì)照組顯著升高(P＜0.05)，睪酮濃度顯著降低(P＜0.05);但GnRH2-MAP免疫組大鼠的抗體自首次免疫后呈現(xiàn)著上升趨勢(shì)，并在個(gè)別時(shí)期

4、顯著高于GnRH2組(P＜0.05)，GnRH并列體免疫組在個(gè)別時(shí)期睪酮濃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P＞0.05)。免疫組睪丸重量及體積均顯著小于對(duì)照組(P＜0.05)。(3)睪丸組織切片顯示:GnRH2-MAP組大鼠的生精小管發(fā)生萎縮，管內(nèi)結(jié)構(gòu)疏松，細(xì)胞層數(shù)及種類極少，精原細(xì)胞分化不明顯;GnRH2免疫組生精小管管腔變大，管內(nèi)細(xì)胞層數(shù)較少，具有少量精子;對(duì)照組生精小管發(fā)育良好，結(jié)構(gòu)緊密，細(xì)胞層數(shù)多，精原細(xì)胞細(xì)胞分化明顯，管腔內(nèi)含有大量精子