脂氧素A4及其類似物BML-111對脂多糖構(gòu)建的先兆子癇模型的治療作用及其可能的作用機(jī)制.pdf

1、研究背景:先兆子癇(pre-eclampsia,PE)是以高血壓和蛋白尿?yàn)樘卣鞯囊环N妊娠特有的綜合征1,在美國其發(fā)病率占所有妊娠的5％-8%2。然而,PE確切病因和發(fā)病機(jī)制現(xiàn)在仍不清楚,分娩仍然是唯一有效的治療方法。大量的文獻(xiàn)表明給妊娠大鼠注射低劑量內(nèi)毒素能模擬出人先兆子癇典型的臨床癥狀3,4,5,一氧化氮及其衍生物在此先兆子癇模型的發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用5。另外,臨床資料表明PE患者體內(nèi)氧化應(yīng)激水平升高6。脂氧素(Lipoxins,

2、LXs)是第一個內(nèi)源性的抗炎促消退的一類花生四烯酸的代謝產(chǎn)物,近來研究表明其具有抗氧化應(yīng)激的作用7。同時PE患者體內(nèi)LXs的含量很低,所以我們認(rèn)為LXs可能通過抑制炎癥或氧化應(yīng)激對胎盤的損傷來緩解PE的癥狀。
　　目的:探討脂氧素A4及其類似物BML-111對先兆子癇的治療作用及其可能的作用機(jī)制。
　　方法:在大鼠妊娠第14天尾靜脈注射1μg/kg脂多糖(Lipo poly saccharide,LPS)構(gòu)建PE模型。20只

3、SD大鼠隨機(jī)分為三組:對照組(Control組),脂多糖組(LPS組)和脂氧素組(LPS+BML-111組)。連續(xù)監(jiān)測妊娠大鼠的血壓;BCA法檢測24h平均尿蛋白量;蘇木素-伊紅(Hematoxylin&Eosine,HE)染色法觀察胎盤和腎臟的形態(tài)學(xué)變化。用人早孕絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞系(TEV-1)進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)分為四組:Control組,LPS組,LPS+LXA4組和LPS+LXA4+Boc-2組。MTT法檢測TEV-1細(xì)胞的活力;流

4、式細(xì)胞儀檢測TEV-1細(xì)胞的凋亡率。脂質(zhì)過氧化試劑盒來檢測胎盤組織,血清和TEV-1細(xì)胞中丙二醛(MDA)的水平;RT-PCR檢測胎盤組織和TEV-1細(xì)胞中超氧化物歧化酶(SOD),過氧化氫酶(GPx)和血紅素加氧酶(HO-1)基因的表達(dá)情況;WesternBlotting檢測胎盤組織和TEV-1細(xì)胞中磷酸化激活的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(p-Erk)和核因子-κB(NF-κB)蛋白的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:(1)LPS組妊娠大鼠的血壓和

5、24h平均尿蛋白量在妊娠第15,17,19天均顯著增加,并且胎盤和腎出現(xiàn)以胎盤絨毛血管壁增厚和腎小球內(nèi)皮細(xì)胞淋巴細(xì)胞聚集為特征的形態(tài)學(xué)變化(與對照組相比,p<0.05)。BML-111能有效緩解LPS所造成的損傷(與LPS組相比,p<0.05)。
　　(2)LPS組妊娠大鼠胎盤組織和血清中MDA水平顯著增加,胎盤組織中SOD、GPx和HO-1基因表達(dá)減弱,胎盤組織中p-Erk和NF-κB蛋白表達(dá)增強(qiáng)(與對照組相比,p<0.05)。

6、BML-111能有效逆轉(zhuǎn)這些變化(與LPS組相比,p<0.05)。
　　(3)與對照組相比,LPS組TEV-1細(xì)胞的活力下降和凋亡率明顯增加(p<0.05);LXA4能逆轉(zhuǎn)LPS對TEV-1細(xì)胞增值的抑制作用和抑制LPS刺激的TEV-1細(xì)胞的凋亡(與LPS組相比,p<0.05);Boc-2部分阻斷LXA4的保護(hù)作用(與LPS+LXA4組相比,p<0.05)。
　　(4)與對照組相比,LPS組TEV-1細(xì)胞中MDA水平顯著增加

7、,SOD、GPx和HO-1基因表達(dá)減弱,p-Erk和NF-κB蛋白表達(dá)增強(qiáng)(p<0.05)。LXA4能有效逆轉(zhuǎn)這些改變(與LPS組相比,p<0.05),Boc-2部分阻斷LXA4的作用(與LPS+LXA4組相比,p<0.05)。
　　結(jié)論:給妊娠大鼠尾靜脈注射低劑量LPS可以構(gòu)建PE模型。LXA4能有效緩解PE的癥狀,可能的機(jī)制是通過降低ERK的活性來抑制氧化敏感的轉(zhuǎn)錄因子NF-κB,進(jìn)而增加抗氧化酶類(SOD,GPx和HO-1)