抑制JNK1磷酸化對糖尿病大鼠心肌細胞TRPC6基因表達的影響.pdf

1、目的
　　 近年來,流行病學研究發(fā)現(xiàn),隨著人們生活水平的提高和生活方式的改變,世界糖尿病患者數(shù)量飛速增長,至2005年全球糖尿病患者已高達3億人,我國是人口大國,糖尿病患者更是高達9240萬,防控形勢十分嚴峻。究其原因,目前認為有兩點:第一,糖尿病促進動脈粥樣硬化的進展,容易發(fā)展為冠狀動脈、腦動脈和周圍動脈粥樣硬化,使心肌梗死、腦卒中和下肢動脈閉塞的可能性增加,從而增加死亡的風險。第二,高血糖直接影響心肌和血管內(nèi)皮細胞,導致體內(nèi)

2、代謝紊亂及心臟的結(jié)構(gòu)和功能改變,最后發(fā)生心力衰竭甚至死亡,即糖尿病心肌病(DCM)。DCM最早在1972年由Ruberler等提出,研究發(fā)現(xiàn)有4名糖尿病患者在冠狀動脈正常的情況下發(fā)生了心衰,提出了糖尿病心肌病的概念,此后迅速成為臨床和基礎(chǔ)研究的熱點。本研究通過建立糖尿病心肌病模型,觀察抑制JNK1對TRPC6的表達的影響,探究JNK1→TRPC6→Ca2+-NFAT信號轉(zhuǎn)導通路引起糖尿病心肌病的可能分子信號機制。
　　 方法

3、r>　　 中國醫(yī)科大學實驗動物部提供SPF級SD大鼠60只,隨機分成糖尿病模型組(A組)與干預組(B組)和對照組(C組),每組20只。正常飼養(yǎng)1w后,禁食24h,期間自由飲水,將鏈脲佐菌(STZ)溶液按60mg·kg-1STZ一次性左下腹腔注射實驗組,對照組注射等量枸椽酸緩沖液。72h后檢測血糖、尿糖情況,以空腹血糖＞11.1mmol/L,非空腹血＞16.7mmol/L,尿糖定性≥+++,動物多飲、多食和尿量增加者確定為DM模型。用藥

4、方案:B組給藥SP600125試劑(JNK1特異性抑制劑)5mg·kg-1·d-1腹腔注射,C組、A組給予等量溶媒。所有大鼠在整個實驗期間均喂標準飲食,自由飲水,不應用胰島素,整個實驗觀察8周,處死取材;對大鼠心肌行HE染色,電鏡觀察心肌超微結(jié)構(gòu),心肌細胞免疫組化檢測JNK1、p-JNK1和TRPC6的表達,Real-Time PCR檢測JNK1 mRNA和TRPC6 mRNA的表達。所有結(jié)果用SPSS17.0 for windows軟

5、件統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果
　　 與C組相比,A組及B組血糖明顯升高(p＜0.01)、體重明顯降低(p＜0.01);A組及B組血糖無明顯差異;B組體重高于A組(p＜0.05);A組及B組左室重、左室指數(shù)、心體比、明顯高于C組(p＜0.01,p＜0.01,p＜0.01),HE染色可見正常大鼠心肌排列整齊,橫紋肌清晰,A組細胞排列紊亂,有局灶性壞死,干預后有所改觀。各組圖片使用顯微圖象分析系統(tǒng)(Meta MorP/DP10/B

6、X41)進行光密度值分析,結(jié)果顯示,A組JNK1、TRPC6平均光密度值(MOD)明顯高于對照組,B組較A組表達減少,差異均具有統(tǒng)計學意義(p＜0.05)。Real-Time PCR結(jié)果顯示:正常組大鼠心肌少量表達JNK1 mRNA和IRPC6 mRNA,而糖尿病組大鼠心肌則顯著升高,是對照組的6倍和8倍(p＜0.01)。干預后,明顯下調(diào)大鼠心肌JNK1 mRNA和TRPC6 mRNA的表達水平。
　　 結(jié)論
　　 1、