日本落葉松體細(xì)胞胚胎發(fā)生與胚性功能蛋白的研究.pdf

1、日本落葉松(Larix kaempferi (Lamb．)Carr．)為松科(Pinaceae)落葉松屬(Larix Mill)植物，它具有生長(zhǎng)快、產(chǎn)量高、材質(zhì)好等優(yōu)點(diǎn)，其木材可供建筑、造紙等用材，目前在我國(guó)東北及日本等山區(qū)已成為重要用材造林樹(shù)種，是值得大力推廣的優(yōu)良樹(shù)種。開(kāi)展體細(xì)胞胚胎發(fā)生的研究，對(duì)體細(xì)胞胚胎發(fā)育的機(jī)理和快速繁育等研究都具有重要的理論意義與實(shí)踐價(jià)值。以日本落葉松樹(shù)種不同基因型的未成熟合子胚為外植體，對(duì)不同基因型、基本培

2、養(yǎng)基，2，4-D的濃度等，進(jìn)行了愈傷組織誘導(dǎo)能力的比較；研究了ABA對(duì)日本落葉松胚性愈傷組織的體細(xì)胞胚成熟的影響，在不同ABA濃度下產(chǎn)生的Ⅰ和Ⅱ期不同發(fā)育階段的體細(xì)胞胚萌發(fā)和植株再生能力進(jìn)行比較；對(duì)體細(xì)胞胚不同發(fā)育過(guò)程進(jìn)行了組織結(jié)構(gòu)，以及成熟胚中淀粉和蛋白質(zhì)的組織化學(xué)的觀測(cè)；對(duì)日本落葉松的胚性愈傷組織進(jìn)行了組成成分和全蛋白質(zhì)的雙向電泳，以及圖譜的分析。主要得到如下結(jié)果： 1)進(jìn)行了日本落葉松愈傷組織的誘導(dǎo)和胚性愈傷組織的篩選，誘

3、導(dǎo)出了體細(xì)胞胚并獲得了再生植株。 2)ABA能促進(jìn)松杉類植物體細(xì)胞胚分化、提高體細(xì)胞胚的發(fā)生頻率，以及抑制早熟體細(xì)胞胚的發(fā)生，降低不正常體細(xì)胞胚的發(fā)生頻率。 3)運(yùn)用組織切片法對(duì)不同發(fā)育時(shí)期體細(xì)胞胚的結(jié)構(gòu)進(jìn)行了觀察，結(jié)果表明，在體細(xì)胞胚的發(fā)育早期階段具有明顯的裂生多胚現(xiàn)象，但最終只有一個(gè)胚才能發(fā)育成熟，成熟的體細(xì)胞胚具有跟和合子胚一樣的結(jié)構(gòu)。 4)運(yùn)用高碘酸-錫夫反應(yīng)(PAS)對(duì)成熟胚中多糖的組織細(xì)胞定位顯示，淀

4、粉等多糖成分在成熟的體細(xì)胞胚中是非均勻分布的；運(yùn)用考馬斯亮藍(lán)染色對(duì)成熟胚中的蛋白質(zhì)的顯微定位表明，成熟胚的細(xì)胞質(zhì)中存在大量的蛋白質(zhì)和大小不同的蛋白儲(chǔ)存泡，在后者的膜上具有大量的膜蛋白。 5)獲得了日本落葉松的胚性愈傷組織的蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜，運(yùn)用ImageMaster 2D圖像分析軟件對(duì)電泳圖譜分析表明：凝膠上展現(xiàn)出475個(gè)不同的蛋白質(zhì)組分，并進(jìn)一步確定了每個(gè)蛋白質(zhì)相應(yīng)的分子量、等電點(diǎn)和以及其相關(guān)性和每種蛋白的相對(duì)含量等。