茶多酚與維生素C抗自由基作用的比較性研究.pdf

1、背景與目的：目前，抗氧自由基藥物的研發(fā)已成為一個(gè)非?；钴S的領(lǐng)域。本文旨在從體外化學(xué)方法、細(xì)胞水平和整體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)三個(gè)方面比較性研究茶多酚(TeaPolyphenol，TP)和維生素C(VitC)的抗氧自由基作用，從而為其新藥開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法：1.離體氧自由基模型：(1)模型制備：采用H2O2/Fe2+體系，通過(guò)Fenton反應(yīng)生成羥自由基(·OH)；采用鄰苯三酚自氧化法，產(chǎn)生超氧陰離子(O2·-)；通過(guò)上述Fen

2、ton反應(yīng)生成·OH，進(jìn)而造成小鼠肝勻漿脂質(zhì)過(guò)氧化以及造成紅細(xì)胞(RBC)懸液中RBC破裂。(2)指標(biāo)測(cè)定：根據(jù)UV-754分光光度計(jì)所測(cè)吸光度，計(jì)算TP和VitC的氧自由基清除率以及對(duì)·OH所致的氧化應(yīng)激的抑制率進(jìn)而分別計(jì)算參數(shù)SC50(清除50﹪氧自由基所需藥物濃度)和IC50(抑制50﹪損傷所需藥物濃度)。 2.體外缺氧缺糖性細(xì)胞損傷模型：(1)缺氧缺糖模型制備：利用離體培養(yǎng)的人胚腎293細(xì)胞，采用缺糖培養(yǎng)基并以連二亞硫酸

3、鈉消除培養(yǎng)基中的氧，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)誘導(dǎo)產(chǎn)生缺氧缺糖損傷模型。(2)指標(biāo)測(cè)定：采用MTT法測(cè)定細(xì)胞的存活率，黃嘌呤氧化酶法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活力，酶偶聯(lián)比色法測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)活力，F(xiàn)enton反應(yīng)比色法測(cè)定總抗氧化能力(TAC)，并計(jì)算IC50。 3.小鼠肝損傷整體動(dòng)物模型：(1)肝損傷模型：將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、模型組及用藥組，采用四氯化碳(CCl4)和醋氨酚(AAP)，分別腹腔注射和灌胃適量，從

4、而制備肝損傷模型。(2)指標(biāo)測(cè)定：在CCl4肝損傷模型中，ipCCl4后16小時(shí)取血及肝臟組織，測(cè)定血清中的GPT和GOT活力，肝臟SOD活力、丙二醛(MDA)含量；在AAP肝損傷模型中，ipAAP12小時(shí)后取血及肝臟組織，測(cè)定血清中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)活力，肝SOD活力和谷胱甘肽(GSH)含量，并計(jì)算有關(guān)參數(shù)ID50(抑制50﹪所需劑量)；光鏡下觀察上述肝損傷組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)論：1.TP和VitC具有十分強(qiáng)大的體外氧自由基

5、清除作用，且呈現(xiàn)明顯的劑量依賴性。SC50和IC50數(shù)據(jù)表明，TP在上述4種模型中的抗氧自由基作用均大于VitC。 2.TP和VitC顯著提高缺氧缺糖自由基損傷人胚腎293細(xì)胞的存活率、SOD活力、TAC以及降低LDH的活性，充分顯示了上述藥物對(duì)缺氧缺糖自由基損傷細(xì)胞的強(qiáng)大的濃度依賴性保護(hù)作用。根據(jù)IC50數(shù)據(jù)，表明其作用強(qiáng)度為：TP＞VitC。 3.TP和VitC對(duì)CCl4和AAP誘發(fā)的小鼠肝損傷具有顯著的保護(hù)作用，表