Nrf2在香煙煙霧提取物刺激人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)變化及與衰老的關(guān)系.pdf

1、背景：
　　慢性阻塞性肺疾?。–OPD）是世界上最常見(jiàn)的慢性疾病之一，吸煙是其最常見(jiàn)也是最危險(xiǎn)的因素。COPD的一個(gè)重要合并癥是肺血管重塑所致的持續(xù)性肺動(dòng)脈高壓。氧化應(yīng)激與COPD的發(fā)展及加重密切相關(guān)。大量研究證明，Nrf2在吸煙誘導(dǎo)的抗氧化損傷反應(yīng)中起關(guān)鍵作用，同時(shí)氧化應(yīng)激與細(xì)胞的衰老密切相關(guān),近來(lái)研究表明，肺血管重塑與衰老有關(guān)。目前關(guān)于Nrf2在香煙煙霧提取物（CSE）誘導(dǎo)細(xì)胞衰老中的作用的研究報(bào)道還很少。
　　目的:<

2、br>　　觀察CSE誘導(dǎo)的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中Nrf2蛋白及衰老相關(guān)蛋白的表達(dá)情況，為深入探討Nrf2在吸煙相關(guān)肺動(dòng)脈高壓和肺血管重塑中的作用提供新思路與實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　采用香煙煙霧提取物（CSE）刺激人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞（HPAEC），用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)；CCK-8檢測(cè)細(xì)胞活性；Western blot檢測(cè)Nrf2及其穩(wěn)定蛋白DJ-1、下游抗氧化蛋白血紅素氧合酶1（HO-1）和醌氧化還原酶（NQO1）、衰老

3、相關(guān)蛋白的表達(dá)變化；細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)Nrf2、P53、P16蛋白表達(dá)變化；采用衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶試劑盒檢測(cè)細(xì)胞β-半乳糖苷酶的表達(dá)變化；應(yīng)用ELISA實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞因子TNFα、MCP-1、TGF-β1、bFGF、IL-6表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果:
　　1、CSE刺激誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變
　　隨著CSE濃度升高和刺激時(shí)間延長(zhǎng),HPAEC逐漸伸展扁平、細(xì)胞間隙增寬、立體感減弱，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)大量顆粒和空泡。<

4、br>　　2、CSE刺激誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞活性變化
　　隨著CSE濃度升高，培養(yǎng)的人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖活性逐漸降低，尤其從1.5％CSE開(kāi)始明顯降低。
　　3、CSE刺激誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)多種蛋白質(zhì)的表達(dá)變化
　　（1）隨CSE濃度升高和刺激時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)Nrf2蛋白及其穩(wěn)定蛋白DJ-1表達(dá)先增高后降低。
　?。?）隨CSE濃度升高和刺激時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)Nrf2調(diào)控的抗氧化蛋白HO-1、NQO1表達(dá)

5、先增高后降低。
　?。?）隨CSE濃度升高和刺激時(shí)間延長(zhǎng)，衰老相關(guān)蛋白P53、P21、P16表達(dá)逐漸增高。
　　4、CSE刺激誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)β-半乳糖苷酶表達(dá)變化
　　隨CSE濃度升高和刺激時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞內(nèi)衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶表達(dá)逐漸增高。
　　5、CSE刺激誘導(dǎo)人肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞因子表達(dá)變化
　　隨CSE刺激時(shí)間延長(zhǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)基上清內(nèi)細(xì)胞因子TNFα、MCP-1、TGF-β1、bFGF、IL-