睪丸孤核受體4(TR4)對去勢抵抗性前列腺癌多西他賽化療敏感性影響的研究.pdf

1、研究背景:
　　去勢抵抗型前列腺癌（Castration resistant prostate cancer，CRPC）是目前臨床治療的難點和基礎研究的熱點，多西他賽是目前臨床上CRPC化療的一線藥物1,2,3。其作用機制是:多西他賽進入細胞后能優(yōu)先結合β-微管蛋白，導致微管在缺少GTP和其他一些輔助蛋白因子時發(fā)生聚合，這種靜態(tài)的聚合破壞了細胞正常的有絲分裂過程，并使細胞分裂停滯于G2/M期，最終將導致細胞凋亡。此外，多西他賽還能

2、誘導Bcl-2蛋白的磷酸化，最終導致腫瘤細胞凋亡。但令人遺憾的是臨床上使用多西他賽化療，腫瘤緩解率僅為12.1％4，中位生存期僅延長2.5個月。且由于遺傳性或獲得性耐藥的產生，化療敏感性逐漸降低5。這種耐藥性的產生的機制還不明確，因而也成為研究的熱點。
　　睪丸孤核受體4(Testicular receptor4，TR4)是類固醇家族中的一員，TR4是NR2C2基因編碼的一種轉錄因子，又名TAK16。TR4廣泛分布于體內各器官。目

3、前發(fā)現的TR4靶基因有很多，如脂質蛋白A，CD36，磷酸烯醇式丙酮酸激酶等。大量的研究表明TR4與脂質代謝、糖代謝，中樞神經發(fā)育、小腦發(fā)育、紅細胞代謝等重要生理功能密切相關。前期研究還發(fā)現，TR4陰性細胞（TR4-/-，來源于TR4基因敲除小鼠）與正常細胞（來源于野生型小鼠）相比，氧化應激、基因修復等功能受損7-11，而氧化應激、基因修復等功能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關。在我們的預實驗中，經過多西他賽處理的前列腺癌細胞PC3細胞TR4表達水平

4、升高，提示了TR4與多西他賽化療可能存在關聯，但國內外較少有TR4與前列腺癌多西他賽相關方面的研究報道。
　　研究目的:
　　本項研究主要的目的是通過細胞及臨床組織兩個層面明確TR4與前列腺癌多西他賽化療敏感性之間的關系，并探討其可能的機制。
　　研究方法:
　　1.運用慢病毒感染技術建立不同TR4表達水平的前列腺癌細胞系。采用MTT法檢測不同TR4表達水平的PC3細胞藥物半數致死量(half maximal i

5、nhibitoryconcentration，IC50)
　　2.采用MTT法檢測不同TR4表達水平的PC3細胞在多西他賽的作用下，不同時間點細胞的存活情況。
　　3.采用凋亡檢測法檢測在多西他賽作用下，TR4表達水平對細胞凋亡的影響。
　　4.運用免疫組化（Immunohistochemistry，IHC）技術檢測接受多西他賽化療后不同預后前列腺癌穿刺標本TR4表達水平，觀察TR4表達水平與前列腺癌化療效果之間的聯系

6、，在臨床層面驗證細胞實驗的結果。
　　研究結果:
　　1.運用慢病毒感染技術，我們建立了TR4基因敲除前列腺癌細胞系(PC3scr/siTR4)和TR4基因過表達細胞系(PC3 vector/TR4)。MTT實驗表明，在TR4敲除細胞系，PC3 siTR4相對PC3 scr細胞多西他賽的IC50下降，TR4過表達細胞PC3 TR4相對PC3 vector細胞多西他賽IC50升高。
　　2.生長曲線實驗表明，在多西他賽持

7、續(xù)作用下，PC3 siTR4存活情況不及PC3scr。與此相對應的是，在多西他賽持續(xù)作用下， PC3 TR4存活情況優(yōu)于PC3 vector。
　　3.凋亡檢測發(fā)現，在多西他賽作用下，TR4敲除細胞凋亡率升高，TR4過表達細胞凋亡率降低。
　　4.免疫組化結果表明，TR4表達水平高低與多西他賽化療效果負相關，在化療效果差（PSA下降＜50％）的病人中，TR4表達水平相對較高;在化療效果好(PSA下降＞50％)的病人中，TR4