二甲基苯蒽誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌模型研究.pdf

1、乳腺癌是目前公認(rèn)的女性第二大殺手,乳腺癌動(dòng)物模型對于乳腺癌病因研究和治療、藥物篩選與評價(jià)均具有重要的意義。二甲基苯蒽(DMBA)誘導(dǎo)大鼠乳腺癌模型較為成熟,但在小鼠體內(nèi)能否成功建立乳腺癌模型研究較少。
　　本文目的是探索 DMBA能否在小鼠體內(nèi)成功誘導(dǎo)乳腺癌,為研究乳腺癌發(fā)病機(jī)制和評價(jià)中藥治療乳腺癌的特色優(yōu)勢提供良好的動(dòng)物模型。
　　本研究采用C57BL/6小鼠灌胃二甲基苯蒽(DMBA)橄欖油溶液50 mg/kg,每周1次,

2、連續(xù)5周的造模方式誘導(dǎo)小鼠乳腺癌模型。通過觀察實(shí)驗(yàn)期間小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存期、外觀、體溫、自主活動(dòng)、外耳微循環(huán)變化及血液流變學(xué)指標(biāo),評價(jià)乳腺癌小鼠模型的中醫(yī)學(xué)體征變化;通過組織切片HE染色法、SABC免疫組化染色法,觀察小鼠乳腺癌組織不同時(shí)期形態(tài)學(xué)變化及TGF-β1含量表達(dá),同時(shí)與臨床病理切片相比較,評價(jià)小鼠乳腺癌生物學(xué)特性與臨床乳腺癌的相似性;通過給予以附子為主藥的溫?zé)崽幏胶鸵云压橹魉幍暮疀鎏幏竭M(jìn)行藥物佐證,檢測能量代

3、謝指標(biāo)(紅細(xì)胞膜Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性、血清雌激素(雌二醇、孕酮)水平、血清細(xì)胞因子及其受體(NGF、TrkA、BDNF、TrkB、bFGF、TGF-β1、PAF)和細(xì)胞外基質(zhì)(TIMP-1、MMP-9、LN、COLⅠ、Ⅱ、Ⅲ)含量,評價(jià)寒熱兩種療法對乳腺癌小鼠的影響。采用MTT法、軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)、BrdU摻入細(xì)胞免疫熒光實(shí)驗(yàn)、健那綠染色實(shí)驗(yàn)、明膠酶譜法、Western-blot方法,觀察DMBA對7

4、701正常肝細(xì)胞分裂增殖能力、線粒體變化、MMPs和TGF-β1表達(dá)的影響,驗(yàn)證DMBA誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化的機(jī)制。
　　結(jié)果表明,造模后小鼠隨時(shí)間的延長逐漸出現(xiàn)畏寒喜暖、蜷縮少動(dòng)、體溫下降、外耳微循環(huán)受阻、全血粘度及紅細(xì)胞聚集指數(shù)增高、紅細(xì)胞ATP酶活性降低、血中雌二醇和孕酮水平升高等狀況,給予藥物干預(yù)后以附子為主藥的溫?zé)崽幏讲粌H可以明顯改善上述狀況,而且可以降低血清中細(xì)胞因子及其受體水平、細(xì)胞外基質(zhì)水平,延長小鼠存活期,阻止腫瘤生

5、長。兩次造模小鼠乳腺腫瘤潛伏期、發(fā)生率、生存曲線相似。
　　組織切片HE染色顯示,DMBA誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌發(fā)生是通過正?！錾堑湫驮錾┳儭櫺园┳冎饾u演變的動(dòng)態(tài)過程,與人體乳腺癌發(fā)展過程相似。免疫組化染色顯示,DMBA誘導(dǎo)的小鼠乳腺癌胞漿中TGF-β1表達(dá)與腫瘤惡性程度呈正相關(guān),與臨床人體乳腺癌結(jié)果一致。
　　體外結(jié)果顯示:DMBA對7701正常肝細(xì)胞表現(xiàn)出劑量依賴性抑制作用,IC50為42.5μg/mL,在50-

6、100μg/mL濃度范圍內(nèi)可以誘導(dǎo)肝細(xì)胞形態(tài)發(fā)生顯著變化。與正常肝細(xì)胞相比,經(jīng)DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞軟瓊脂克隆形成能力明顯提高,BrdU摻入細(xì)胞陽性細(xì)胞數(shù)明顯增多,細(xì)胞內(nèi)線粒體異常、增多。DMBA處理后的肝細(xì)胞和正常肝細(xì)胞電泳圖譜存在明顯差異,前者與 LLC、4T1細(xì)胞蛋白表達(dá)相似。明膠酶圖譜顯示經(jīng) DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞MMP-9和MMP-2活性增加。Western-blot結(jié)果顯示,經(jīng)DMBA誘導(dǎo)的肝細(xì)胞TGF-β1表達(dá)量明顯高于正常肝