A20基因修飾的血管內(nèi)支架的研制及其防治豬頸動脈再狹窄的實驗研究.pdf

1、第三軍醫(yī)大學博士學位論文A20基因修飾的血管內(nèi)支架的研制及其防治豬頸動脈再狹窄的實驗研究姓名：周振華申請學位級別：博士專業(yè)：神經(jīng)病學指導教師：李露斯20090501第二軍醫(yī)大學博士學位論文轉(zhuǎn)基因EPCs種植支架后經(jīng)流動腔，激光共聚焦顯微鏡及電鏡觀察檢測細胞改變。3A20基因修飾血管內(nèi)支架防治再狹窄的實驗研究A20基因修飾支架的加工；活體植入豬的頸動脈，對照組pcDNA31voidvectors為A組，A20修飾的支架為B組；A20表達的

2、檢測；通過如下指標評判兩組之間的效果：頸動脈造影；病理組織形態(tài)分析及病理學積分；cD31及PcNA免疫組化檢測；凋亡檢測；電鏡檢測內(nèi)皮細胞及平滑肌細胞。結(jié)果1EPCs培養(yǎng)鑒定11細胞體外培養(yǎng)2—3d后，細胞呈短梭形、多角形等多種形態(tài)，有少量細胞突起。培養(yǎng)7—9d，出現(xiàn)鵝卵石樣細胞組成的細胞集落，形成明顯克隆。繼續(xù)培養(yǎng)3—4d集落逐漸散開。重懸后繼續(xù)培養(yǎng)仁5d細胞逐漸融合，呈現(xiàn)典型的“鋪路石’’樣。12EPCs超微結(jié)構(gòu)：透射電鏡觀察結(jié)果示

3、EPCs內(nèi)可見特征性的WP小體(Weibel一palade小體)，同時可見大量吞噬小泡、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等細胞器。13培養(yǎng)EPCs免疫化學染色：早期CD34、CDl33、KDR表達呈陽性，三周后細胞CD34、砌)R、vWF表達呈陽性，但CDl33表達呈陰性。14生物學功能檢測：能攝取DiI—acLDL并能結(jié)合FITC—UEAI，雙染色陽性細胞，被認為是正在分化的EPCs，2轉(zhuǎn)基因內(nèi)皮祖細胞種植支架的研制21A20成功轉(zhuǎn)染了EPCs，經(jīng)免疫

4、組化和W色stemblot檢測陽性。22支架上面細胞生長狀況培養(yǎng)七天后的支架經(jīng)激光共聚焦顯微鏡觀察：1)AB兩組支架上面細胞均能完全覆蓋支架，實現(xiàn)支架的內(nèi)皮化，且能吞噬LDL，顯示生物學功能良好。2)而經(jīng)過流動腔后AB兩組支架上面細胞有所脫落，A組細胞數(shù)量明顯減少，呈散在分布，沒有覆蓋支架表面；B組支架上面細胞雖有所脫落，但能基本覆蓋支架，兩種方法計數(shù)提示B組明顯多于A組支架上面細胞數(shù)量(PO01)。3A20基因修飾血管內(nèi)支架防治再狹窄