體細(xì)胞核移植技術(shù)構(gòu)建豬克隆胚胎的研究.pdf

1、四川農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文體細(xì)胞核移植技術(shù)構(gòu)建豬克隆胚胎的研究姓名：楊宇申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：動(dòng)物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：馬恒東;張德福20070601經(jīng)多次孤雌激活實(shí)驗(yàn)表明，以山梨糖醇為激活液的效果優(yōu)于甘露醇，3 0 0 V ／r a m 、2 0 9 s 、3 D C 與2 0 0 V ／r a m 、6 0 鄴、I D C 的孤雌激活卵裂率和囊胚率都顯著高于其他組；電激活后分別在成熟培養(yǎng)液中添加2 m m o l ／L 6 - D

2、 M A P 或2 m g ／m l C B 進(jìn)行化學(xué)處理，所得卵裂率、囊胚率上均無(wú)明顯差異，但C B 組死卵率較高；2 0 t t m o F L 離子霉素㈣4 0 m i n 激活效果最好；體外成熟培養(yǎng)3 6 h 、4 0 h 的卵母細(xì)胞在卵裂率和囊胚率上明顯不如4 4 h 、4 8 h ，成熟培養(yǎng)4 4 h 的卵母細(xì)胞卵裂率最高可達(dá)8 5 ．5 ％，4 8 h 囊胚率最高為4 4 ．9 ％。比較了盲吸法、擠壓去核法以及s p i

3、n d l e - v i e w 去核法( 極化顯微鏡去核法) ，表明s p i n d l e - v i e w 法的去核率可以達(dá)到9 5 ．5 ％，是一種安全、高效的去核方法。以胎兒成纖維細(xì)胞和成年耳成纖維細(xì)胞作為供核體細(xì)胞構(gòu)建的重構(gòu)胚后期發(fā)育效果良好；1 0 代以內(nèi)的胎兒成纖維細(xì)胞更有利于重構(gòu)胚的發(fā)育，融合率、卵裂率和囊胚率都很高。2 0 0 V ／r a m ，6 0 9 s ，I D C 電激活后，在以B 2 為培養(yǎng)基的培

4、養(yǎng)體系中進(jìn)行培養(yǎng)，無(wú)論在重構(gòu)胚的融合率、卵裂率和囊胚率上均為最高( 8 7 ．2 ％、7 9 ．3 ％、2 8 ．7 ％) ，但- 與- N C S U - 2 3 差異不顯著。從實(shí)驗(yàn)成本考慮，采用傳統(tǒng)的N C s U - 2 3 培養(yǎng)基是可行的。在以上實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，對(duì)實(shí)驗(yàn)室獲得的早期重構(gòu)胚胎( 1 ~ 4 細(xì)胞胚胎) 進(jìn)行了手術(shù)法胚胎移植。截至出稿時(shí)，已移植受體母豬1 6 頭，第一批預(yù)實(shí)驗(yàn)6 頭2 0 - 2 2 天均返情；第二批克隆