枯草芽孢桿菌堿性蛋白酶抗煙草花葉病毒活性及其酶學性質的初步研究.pdf

1、堿性蛋白酶(Alkaline Protease)是指在pH為堿性的條件下水解蛋白質肽鍵的酶類，是一種廣譜性的蛋白水解酶，且來源廣泛。由微生物法獲得堿性蛋白酶成本低、產(chǎn)量高，方法科學可行。本研究旨在利用堿性蛋白酶降解煙草花葉病毒(TMV)外殼蛋白從而達到防治煙草花葉病的目的，為植物病毒病的防治提供一條嶄新而有效的途徑。論文從產(chǎn)堿性蛋白酶枯草芽孢桿菌的篩選、堿性蛋白酶的分離純化、堿性蛋白酶抗TMV活性及其酶學性質等方面進行研究，主要研究結果

2、如下： (1)從實驗室已保存的4株枯草芽孢桿菌中，篩選出一株產(chǎn)高活性堿性蛋白酶的枯草芽孢桿菌W-QX-1。 (2)對菌株的發(fā)酵條件進行了研究，分別試驗了起始pH和裝液量對發(fā)酵產(chǎn)酶的影響，繪制了發(fā)酵過程曲線。確定其最適發(fā)酵條件為：發(fā)酵起始pH為8.0，裝液量為20mL/250mL，發(fā)酵周期為36h。 (3)菌株W-QX-1的發(fā)酵液經(jīng)硫酸銨鹽析、透析及非變性電泳分離得到純的堿性蛋白酶，SDS-PAGE測得其相對分子質

3、量為42400。 (4)采用半葉枯斑法在心葉煙上檢測W-QX-1堿性蛋白酶抗TMV活性，發(fā)現(xiàn)該酶對TMV具有明顯的體外鈍化作用，酶液濃度為20mg/L、50mg/L、100mg/L和200mg/L時，其鈍化效果分別達到45.20％、53.40％、60.42％和76.73％1該酶對TMV的初侵染和體內(nèi)復制增殖具有一定的抑制能力，實驗結果表明在TMV侵染前24h施用濃度為200mg/L堿性蛋白酶液抑制其侵染力的效果達到50.35％，

4、而在TMV侵染后施用也具有一定的抑制其復制增殖的作用，但效果并不明顯。 (5)以酪蛋白為底物，對菌株W-QX-1產(chǎn)堿性蛋白酶酶學性質進行了研究。該酶的最適作用溫度為50℃左右，在硼酸一硼砂緩沖液中的最適作用pH為7.8，在Tris-HCl緩沖液中的最適作用pH為8.0，在pH6～10范圍內(nèi)，45℃以下酶的穩(wěn)定性較好。Ca2+、K+、Mg2+對酶都有一定的激活作用，而Cu2+、Ag+則能抑制酶活；EDTA對該酶顯示出較強的抑制作用